[發明專利]血液樣本抗癲癇類藥物檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202310444549.9
• 申請日: 2023-04-23
• 公開（公告）號: CN116500158A
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 賈子強;栗琳;周立;雒琴;江偉;丁亮;王麗君
• 申請（專利權）人: 北京豪思生物科技股份有限公司;江蘇豪思生物科技有限公司;湖南豪思生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

1.血液樣本抗癲癇類藥物檢測方法，其特征在于，所述抗癲癇類藥物包括卡馬西平、環氧卡馬西平、奧卡西平、10,11-二氫-10-羥基卡馬西平、苯妥英鈉、拉莫三嗪、左乙拉西坦、普瑞巴林、加巴噴丁、托吡酯、丙戊酸、苯巴比妥和拉科酰胺；

所述檢測方法包括將經過前處理的待測樣本使用高效液相色譜串聯質譜檢測，將檢測值帶入標準曲線中，計算得到血液樣本中抗癲癇類藥物的含量；

所述前處理包括采用沉淀劑處理待測樣本，所述沉淀劑中含有內標，所述內標為所述抗癲癇類藥物的同位素；

卡馬西平、環氧卡馬西平、奧卡西平、10,11-二氫-10-羥基卡馬西平、苯妥英鈉、拉莫三嗪、左乙拉西坦、普瑞巴林、加巴噴丁和拉科酰胺采用正離子監測模式；丙戊酸、托吡酯和苯巴比妥采用負離子監測模式。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述沉淀劑包括甲醇；

優選地，所述內標包括同位素標記的所述抗癲癇類藥物；

優選地，所述內標包括卡馬西平-d8、環氧卡馬西平-d6、10,11-二氫-10-羥基卡馬西平-d6、奧卡西平-d4、苯妥英鈉-d10、拉莫三嗪-13C3,d3、左乙拉西坦-d6、普瑞巴林-d4、加巴噴丁-d4、托吡酯-d12、丙戊酸-d6、拉科酰胺-d6和苯巴比妥-d5；

優選地，所述沉淀劑中，各內標的濃度為：環氧卡馬西平-d6的濃度為50ng/mL；卡馬西平-d8的濃度為100ng/mL；加巴噴丁-d4、拉科酰胺-d6、拉莫三嗪-13C3,d3、左乙拉西坦、托吡酯-d12和普瑞巴林-d4濃度為200ng/mL；10,11-二氫-10-羥基卡馬西平-d6、苯妥英鈉-d10和奧卡西平-d4的濃度為500ng/mL；丙戊酸-d6和苯巴比妥-d5的濃度為2000ng/mL；

優選地，所述前處理包括將待測樣本與沉淀劑渦旋混勻，分離上清后將上清進行液相色譜串聯質譜檢測；

優選地，所述前處理包括將待測樣本與沉淀劑渦旋混勻3～5min，2000～4000g/min離心5～10min后，吸取上清進行高效液相色譜串聯質譜檢測；

優選地，待測樣本與所述沉淀劑的體積比為1:(3～5)；

優選地，待測樣本與所述沉淀劑的體積比為1:3。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，高效液相色譜檢測的流動相包括流動相A和流動相B；所述流動相A為水相，所述流動相B為有機相；所述流動相A含有乙酸銨和甲酸；所述流動相B含有甲酸；

優選地，所述流動相A為含有1.5～2.5mM乙酸銨和0.1～0.2％v/v甲酸的水溶液；

優選地，所述流動相A為含有2mM乙酸銨和0.1％v/v的甲酸的水溶液；

優選地，所述流動相B為含有0.1～0.2％v/v甲酸的甲醇；

優選地，所述流動相B為含有0.1％v/v甲酸的甲醇；

優選地，所述高效液相色譜檢測使用Waters?BEH?C18色譜柱。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，卡馬西平、環氧卡馬西平、奧卡西平、10,11-二氫-10-羥基卡馬西平、苯妥英鈉、拉莫三嗪、左乙拉西坦、普瑞巴林、加巴噴丁、托吡酯和拉科酰胺高效液相色譜的洗脫程序為：

0min，流動相A?90％，流動相B10％；

0.5min，流動相A?90％，流動相B10％；

2.0min，流動相A?40％，流動相B?60％；

2.8min，流動相A1％，流動相B?99％；

3.8min，流動相A1％，流動相B?99％；

4.5min，流動相A?90％，流動相B10％；

5.5min，流動相A?90％，流動相B10％。