[發(fā)明專利]超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)海參及其制品中非法添加糖類物質(zhì)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310438840.5
• 申請(qǐng)日: 2023-04-19
• 公開（公告）號(hào): CN116642965A
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程志;魏莉莉;薛霞;胡梅;劉艷明;宿書芳;周傳靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 王翠翠

本發(fā)明公開了一種超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)海參及其制品中非法添加糖類物質(zhì)的方法。樣品用乙醇?水(8+2，v+v)溶液提取，經(jīng)改進(jìn)式QuEChERS快速凈化，用大氣壓化學(xué)電離?多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行檢測(cè)。在10～750mg/L范圍內(nèi)，5種目標(biāo)物的線性關(guān)系良好，校準(zhǔn)曲線為二次曲線，其相關(guān)系數(shù)均大于0.999。本方法對(duì)干制海參、即食海參等海參制品進(jìn)行前處理并測(cè)定，方法檢出限40和80mg/kg，定量限100和200mg/kg。回收率實(shí)驗(yàn)5種目標(biāo)物回收率范圍為83.1％～103.2％，RSD均小于8.7％。方法前處理簡(jiǎn)單，提取效率高，檢出限低，能有效地避免雜質(zhì)的干擾，實(shí)現(xiàn)了快速、精準(zhǔn)定性定量檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)海參及其制品中非法添加糖類物質(zhì)的方法。

背景技術(shù)

海參作為我國(guó)“海八珍”之一，一直是餐桌上的佳肴。近年來，海參及其制品質(zhì)量受到社會(huì)高度關(guān)注。一些不法商販在制作干海參的過程中為了達(dá)到塑性，增重等目的添加糖類物質(zhì)，嚴(yán)重影響海參干制品的質(zhì)量和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。外源性糖主要指在海參加工過程中人為加入的糖類成分，有果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、低聚糖等。目前針對(duì)海參及其制品中外源性糖類的分析研究，大多局限在還原糖領(lǐng)域，不能充分反映產(chǎn)品中摻加的總糖情況(無法測(cè)定非還原糖)，也不能反應(yīng)具體添加了哪些外源性糖。相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定海參中水溶性總糖糖的限量定為≤3.0g/100g，檢測(cè)方法為測(cè)定還原性糖類物質(zhì)的方法。目前市場(chǎng)上海參加工生產(chǎn)企業(yè)有意避開標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)，在干海參加工過程中加入非還原糖，得到摻糖干海參。

目前針對(duì)海參基質(zhì)檢測(cè)糖類物質(zhì)的研究不多，前處理手段主要集中在衍生法、沉淀蛋白法、檢測(cè)手段集中在比色法、液相色譜法、離子色譜法，上述方法存在僅能測(cè)定總糖、需要衍生操作繁瑣等缺陷。由于高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有選擇性強(qiáng)、靈敏度高和檢測(cè)通量大等優(yōu)點(diǎn)，所以本研究采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，優(yōu)化離子源，最終選擇APCI源來進(jìn)行檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

面對(duì)輿情，現(xiàn)有的方法以檢測(cè)還原性糖為主，不包含風(fēng)險(xiǎn)最高的蔗糖。本申請(qǐng)利用高比例有機(jī)相高溫超聲提取目標(biāo)物，優(yōu)化QuEChERS方法選擇新型QuEChERS凈化材料，利用氨基色譜柱和APCI離子源實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物精準(zhǔn)分離和檢測(cè)信號(hào)增強(qiáng)的作用。建立快速、高通量的海參摻糖檢測(cè)技術(shù)以適用于目前市場(chǎng)監(jiān)管的迫在眉睫，本研究對(duì)維護(hù)和規(guī)范海參市場(chǎng)，保護(hù)消費(fèi)者的權(quán)益有重大意義。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)海參及其制品中非法添加糖類物質(zhì)的方法，包括以下步驟：

(1)樣品前處理：

提取：取樣品，均質(zhì)，粉碎，準(zhǔn)確稱取均質(zhì)后的試樣于具塞離心管中，加入乙醇-水溶液，渦旋，水浴震蕩，離心，待凈化；

凈化：取上述提取液，注入內(nèi)含凈化填料的凈化管中，渦旋混勻，離心濾膜過濾，供檢測(cè)；

(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：

分別準(zhǔn)確稱取5種糖類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10mL容量瓶中，水溶解并定容至刻度，配制質(zhì)量濃度為5.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃避光保存；分別移取各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備液2.00mL于10mL容量瓶，用甲醇稀釋，配制濃度為1mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液；移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋，配制濃度為10～750μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液；

(3)超高效液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)。

進(jìn)一步地，提取的條件為：取樣品適量，均質(zhì)粉碎，準(zhǔn)確稱取均質(zhì)后的試樣1.0g于50mL具塞離心管中，加入20mL體積比為8:2的乙醇-水溶液，渦旋混勻30s后，50℃水浴震蕩150min，于8000r/min離心5min，待凈化；