[發(fā)明專利]尖吻蝮蛇磷脂酶A2特征多肽組及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310433239.7
• 申請(qǐng)日: 2023-04-21
• 公開（公告）號(hào): CN116217666A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 咸瑞卿;薛維麗;王聰聰;王夙博;王維劍;張冬梅;賀美蓮;石峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C07K7/08;G01N33/68;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 北京元本知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11308
• 代理人: 徐蘋

1.尖吻蝮蛇磷脂酶A2特征多肽組，其特征在于，所述特征多肽組由特征多肽1和特征多肽2組成；其中特征多肽1的氨基酸序列為WDIYPYSWK，特征多肽2的氨基酸序列為DNLDTYNSDTYWR。

2.一種權(quán)利要求1所述尖吻蝮蛇磷脂酶A2特征多肽組的應(yīng)用，特征在于，所述特征多肽組用于鑒別磷脂酶A2的種屬來(lái)源。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，采用以下步驟：

（1）取待測(cè)樣品溶解，進(jìn)行酶解滅活后作為供試品溶液；

（2）水經(jīng)過(guò)酶解處理，制備空白溶液；

（3）取步驟（1）所制備的供試品溶液及步驟（2）所制備的空白溶液注入液相色譜-質(zhì)譜儀，采用電噴霧正離子模式，進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，以質(zhì)荷比m/z?629.30→302.11及629.30→680.34作為特征多肽1的檢測(cè)離子對(duì)，以質(zhì)荷比m/z?831.86→230.08及831.86→941.41作為特征多肽2的檢測(cè)離子對(duì)，以確定待測(cè)樣品中是否含有尖吻蝮蛇磷脂酶A2特征多肽中的特征多肽1和特征多肽2；

（4）如果同時(shí)檢測(cè)到特征多肽1和特征多肽2，則證明待測(cè)樣品中含有磷脂酶A2且來(lái)源于尖吻蝮蛇；反之則證明待測(cè)樣品中不含有來(lái)自尖吻蝮蛇的磷脂酶A2。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟（3）所述液相色譜-質(zhì)譜儀中液相和質(zhì)譜檢測(cè)條件中，液相條件為：Waters?ACQUITY?UPLC?BEH?C₁₈?色譜柱（50?mm*2.1?mm，1.7?μm）；流動(dòng)相A：0.1%甲酸溶液流動(dòng)相，B：0.1%甲酸乙腈；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：2?μL；流速：0.3ml/min；按下表進(jìn)行梯度洗脫：

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟（2）的具體操作為：

①待測(cè)樣品溶解：待測(cè)樣品用25?mM碳酸氫銨配制為濃度1?μg/μL；

②酶解：取步驟①溶解后樣品100?μL，加1?μg蛋白酶于37℃過(guò)夜酶解，酶解結(jié)束后高溫滅活；

③離心：最后取步驟②酶解滅活的樣品，12000?rpm離心10?min，取上清液即得待測(cè)樣品。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的蛋白酶為胰蛋白酶。