[發(fā)明專利]一種脫細(xì)胞氣管支架的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310424159.5
• 申請(qǐng)日: 2023-04-20
• 公開（公告）號(hào): CN116271239A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 史宏?duì)N;盧毅;盧丹;孫飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36
• 代理公司: 揚(yáng)州蘇中專利事務(wù)所(普通合伙) 32222
• 代理人: 許必元

本發(fā)明涉及一種脫細(xì)胞氣管支架的制備方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域；首先取新鮮氣管，進(jìn)行預(yù)處理；將處理好的氣管轉(zhuǎn)移至質(zhì)量體積比為1%?4%的CHAPS溶液中在37℃恒溫?fù)u床以100rpm轉(zhuǎn)速孵育3h；孵育后的氣管用無(wú)菌PBS洗滌；將洗滌完畢的氣管置于工作溶液中在37℃恒溫?fù)u床以60rpm轉(zhuǎn)速孵育12h；本發(fā)明脫細(xì)胞法與傳統(tǒng)DEM法相比，整個(gè)流程時(shí)間縮短至16h以內(nèi)，此外脫細(xì)胞后力學(xué)強(qiáng)度有所提升、細(xì)胞黏附效率增加；與改良真空輔助脫細(xì)胞法相比時(shí)間也縮短一半以上，且無(wú)需特殊容器裝載以及使用真空泵等大型儀器，整個(gè)脫細(xì)胞生物相容性、免疫原性也同樣符合組織工程學(xué)的要求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種脫細(xì)胞氣管支架的制備方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

目前去污劑-聯(lián)合酶法(DEM)已在臨床氣管替代治療效果中得到初步的應(yīng)用，但患者術(shù)后出現(xiàn)較多并發(fā)癥，支架制備周期長(zhǎng)，經(jīng)典DEM脫細(xì)胞方案制備氣管支架，使用的多為離子型去污劑，其去污其需要10天左右的制備周期，成本較高、耗時(shí)較長(zhǎng)，不宜應(yīng)用于緊急氣管移植物的制備。而真空輔助的DEM脫細(xì)胞方案也存在著設(shè)備、場(chǎng)所等局限性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種脫細(xì)胞氣管支架的制備方法，在保留有效基質(zhì)成分的基礎(chǔ)上，更加快速、有效地完成脫細(xì)胞流程，并制備出適合組織工程學(xué)要求的氣管支架。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種脫細(xì)胞氣管支架的制備方法，所述制備方法如下：

步驟(1)：原料取新鮮氣管，進(jìn)行預(yù)處理；

步驟(2)：將步驟(1)中處理好的氣管轉(zhuǎn)移至質(zhì)量體積比為1％-4％的3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸內(nèi)鹽溶液中在37℃恒溫?fù)u床以60-120rpm轉(zhuǎn)速孵育1-6h；

步驟(3)：孵育后的氣管用無(wú)菌PBS洗滌；

步驟(4)：將洗滌完畢的氣管置于含pH為8.0的Tris-HCl緩沖液，1-5mM?MgSO₄，1-10mM?CaCl₂，2000-4000U/L?DNase-I工作溶液中在37℃恒溫?fù)u床以60-120rpm轉(zhuǎn)速孵育6-12h。

3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸內(nèi)鹽(3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]propanesulfonate，CHAPS)是兩性離子去污劑中的代表性的物質(zhì)，其擁有反應(yīng)條件溫和、易生物降解、毒性低、低濃度時(shí)效率高等優(yōu)點(diǎn)。在其處理后銜接脫氧核糖核酸酶DNaseⅠ可制備出低免疫原性、低生物毒性、保留一定力學(xué)強(qiáng)度并實(shí)現(xiàn)細(xì)胞增殖黏附功能的氣管支架。

優(yōu)選的，步驟(1)中，無(wú)菌手術(shù)操作獲取新西蘭兔氣管為原料，修剪多余筋膜、脂肪組織，之后將氣管浸沒于提前4℃預(yù)冷的加入的三抗的磷酸緩沖鹽溶液中漂洗。

優(yōu)選的，步驟(1)所述原料取新鮮氣管，進(jìn)行預(yù)處理，具體步驟如下：無(wú)菌手術(shù)操作獲取新鮮氣管為原料，經(jīng)過(guò)手術(shù)器械修剪多余的筋膜、脂肪組織后，將氣管浸沒于提前4℃預(yù)冷的加入三抗的PBS中漂洗3遍。

優(yōu)選的，步驟(2)中，將步驟(1)中處理好的氣管轉(zhuǎn)移至質(zhì)量體積比為1％-4％的3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸內(nèi)鹽溶液中在37℃恒溫?fù)u床以100rpm轉(zhuǎn)速孵育3h。

優(yōu)選的，步驟(3)中，孵育后的氣管用無(wú)菌PBS洗滌3次，每次5min。

優(yōu)選的，步驟(4)將洗滌完畢的氣管置于含pH為8.0的Tris-HCl緩沖液，1.5mMMgSO₄，2mM?CaCl₂，2000-4000U/L?DNase-I工作溶液中在37℃恒溫?fù)u床以60rpm轉(zhuǎn)速孵育12h。