[發(fā)明專利]一種用于篩選高親和力納米抗體的工程菌及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310413773.1
• 申請(qǐng)日: 2023-04-18
• 公開（公告）號(hào): CN116606790A
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王文義;胡悅;霍莉;黃文娣;蔣詩(shī)越;楊佳敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南民族大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12N15/11;C12N15/13;C12N15/65;C12N15/66;C07K16/00;C40B30/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 賴定珍

1.一種用于篩選高親和力納米抗體的工程菌，其特征在于，所述工程菌為含有雙表達(dá)載體的大腸桿菌；所述雙表達(dá)載體中含有目的抗原蛋白的序列、納米抗體的序列、以及氨芐青霉素抗性基因TEM-1型β-內(nèi)酰胺酶的兩個(gè)片段BLF1和BLF2的序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用于篩選高親和力納米抗體的工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌的菌株為Origami(DE3)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種用于篩選高親和力納米抗體的工程菌，其特征在于，所述雙表達(dá)載體為pRSFDuet-1-BLF1-Linker-POI-Nb-Linker-BLF2；其中，所述pRSFDuet-1為載體質(zhì)粒，所述POI為目的抗原蛋白的序列，所述Nb為納米抗體的序列。

4.一種如權(quán)利要求3所述的用于篩選高親和力納米抗體的工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、合成C端含有Linker的片段BLF1-Linker，所述BLF1-Linker片段的序列如SEQ?IDNO:1所示；再將所述片段BLF1-Linker、所述目的抗原蛋白的DNA片段與pRSFDuet-1進(jìn)行連接，測(cè)序正確后，得到載體pRSFDuet-1-BLF1-Linker-POI；

S2、合成N端含有Linker的片段Linker-BLF2，所述Linker-BLF2片段的序列如SEQ?IDNO:3所示；將所述納米抗體的DNA片段、所述Linker-BLF2片段與載體pRSFDuet-1-BLF1-Linker連接，測(cè)序正確后，得到所述雙表達(dá)載體pRSFDuet-1-BLF1-Linker-POI-Nb-Linker-BLF2；

S3、將所述雙表達(dá)載體pRSFDuet-1-BLF1-Linker-POI-Nb-Linker-BLF2轉(zhuǎn)入所述Origami(DE3)中。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種用于篩選高親和力納米抗體的工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，所述BLF1-Linker片段的5’端和3’端分別帶有BamHI和PstI酶切位點(diǎn)，所述BLF1-Linker片段編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；

所述Linker-BLF2片段的5’端和3’端分別帶有KpnI和XhoI酶切位點(diǎn)，所述Linker-BLF2片段編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:4所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述一種用于篩選高親和力納米抗體的工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，將BamHI和PstI酶切的所述BLF1-Linker片段、PstI和HindIII酶切的所述目的抗原蛋白的DNA片段與所述載體pRSFDuet-1連接，得到pRSFDuet-1-BLF1-Linker-POI；再將NdeI和KpnI酶切的所述納米抗體的DNA片段、KpnI和XhoI酶切的所述Linker-BLF2片段連接至所述pRSFDuet-1-BLF1-Linker-POI，得到所述雙表達(dá)載體pRSFDuet-1-BLF1-Linker-POI-Nb-Linker-BLF2。

7.一種用于篩選高親和力納米抗體的工程菌的應(yīng)用，其特征在于，采用如權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的工程菌比較不同納米抗體的抗原親和力，或采用如權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的工程菌構(gòu)建納米抗體文庫(kù)，并采用所述納米抗體文庫(kù)篩選高親和力納米抗體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種用于篩選高親和力納米抗體的工程菌的應(yīng)用，其特征在于，所述比較不同納米抗體的抗原親和力的步驟為：將至少兩種所述工程菌培養(yǎng)并調(diào)整為OD₆₀₀值相同的待測(cè)菌液，將至少兩種待測(cè)菌液分別在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行等體積點(diǎn)板培養(yǎng)；根據(jù)菌落生長(zhǎng)情況好壞判斷納米抗體的抗原親和力高低；

其中，每種所述工程菌中的雙表達(dá)載體含有相同的目的抗原蛋白序列和不同的納米抗體序列。