[發明專利]一種頭孢曲松及其制劑中的聚合物雜質的HPLC檢測方法

在審

• 申請號: 202310405511.0
• 申請日: 2023-04-17
• 公開（公告）號: CN116413364A
• 公開（公告）日: 2023-07-11
• 發明（設計）人: 劉爽;談宗華;劉明莉;唐琴;張薇;郭彬;萬婷婷;鄭流茜;王曉;吳統選
• 申請（專利權）人: 天圣制藥集團重慶藥物研究院有限公司;天圣制藥集團股份有限公司;湖北天圣藥業有限公司;湖南天圣藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34;G01N30/74
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責任公司 50209
• 代理人: 張建

本發明公開了一種頭孢曲松及其制劑中的聚合物雜質的HPLC檢測方法，包括步驟：使用高效液相色譜法（HPLC）對頭孢曲松及其制劑中的聚合物雜質進行分離測定，其中聚合物雜質為頭孢曲松自身聚合以及頭孢曲松與降解產物之間聚合形成的二聚體、三聚體和多聚體，該方法以球狀親水硅膠為填充劑，并以緩沖鹽?有機相溶液作為流動相，流動相中的有機相選自乙腈或甲醇。本發明具有分離度好、簡單快速、專屬性強、靈敏度高的特點，能夠對頭孢曲松及其制劑的聚合物雜質進行更好的質量控制，保證整個產品的質量和臨床用藥安全。

技術領域

本發明涉及色譜法測試或分析技術領域，具體來說，涉及頭孢曲松及其制劑中的聚合物雜質的HPLC檢測方法。

背景技術

頭孢曲松鈉為第三代頭孢菌素類抗生素。對腸桿菌科細菌有強大活性。對大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產氣腸桿菌、氟勞地枸櫞酸桿菌、吲哚陽性變形桿菌、普魯威登菌屬和沙雷菌屬的MIC90介于0.12-0.25mg/L之間。陰溝腸桿菌、不動桿菌屬和銅綠假單胞菌對本品的敏感性差。對流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌有較強抗菌作用，對溶血性鏈球菌和肺炎球菌亦有良好作用。對金黃色葡萄球菌的MIC為2-4mg/L。耐甲氧西林葡萄球菌和腸球菌對本品耐藥。多數脆弱擬桿菌對本品耐藥。

頭孢曲松化學結構如下所示：

中國藥典2020版中對頭孢曲松鈉鹽的質量控制包括酸堿度度、澄清度與顏色、有關物質(頭孢曲松反式異構體)、頭孢曲松聚合物雜質、殘留溶劑、重金屬、細菌內毒素等。

其中對頭孢曲松聚合物雜質的質量控制檢測按照分子排阻色譜法(中國藥典通則0514)測定。色譜條件為：用葡聚糖凝膠G-10(40～120μm)為填充劑；玻璃柱內徑1.0～1.4cm，柱長30～40cm；以pH?7.0的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液[0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液(61∶39)]為流動相A，以水為流動相B；流速為每分鐘1.5ml；檢測波長為254nm；進樣體積100～200μl。具體測定方法為：以流動相A為流動相，精密量取供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以流動相B為流動相，精密量取對照溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。其質量控制限度為：按外標法以頭孢曲松峰面積計算，含頭孢曲松聚合物的量不得過0.5％。

抗生素中的高分子雜質，統稱為聚合物。大量研究表明引發頭孢菌素過敏反應的過敏原是制劑中高分子聚合物雜質，通過控制聚合物雜質可控制過敏反應的發生。因此，頭孢曲松及其制劑中聚合物雜質的含量水平的高低直接決定了產品的質量及后續臨床用藥的安全。盡管中國藥典2020版規定了對頭孢曲松及其制劑的聚合物雜質進行控制，但其采用葡聚糖凝膠G10的分子排阻色譜方法進行，該方法實際上對聚合物雜質和主成分無法進行有效分離，導致聚合物雜質檢出結果偏低，其結果無法準確代表樣品中聚合物雜質的真實含量，也就無法保障臨床用藥安全，從而導致實際用藥過程中仍然大量產生過敏反應。

中國專利申請CN112798705A公開了一種頭孢曲松鈉聚合物雜質的檢測方法，包括步驟：取頭孢曲松鈉原料藥配制供試品溶液，進行HPLC檢測，檢測條件如下：固定相采用球狀蛋白親水改性硅膠為填充劑的色譜柱；流動相采用體積比為93～97:7～3的流動相A和流動相B構成的混合溶液，所述流動相A為0.1～0.2％的三乙胺溶液，用磷酸溶液調節pH值至5.5～6.5，所述流動相B為乙腈。

該專利文獻披露的方案采用三乙胺與磷酸組成的緩沖鹽體系，但由于三乙胺屬于揮發性有機堿，其配置重現性相對較差，其結果仍然無法準確代表樣品中聚合物雜質的真實含量。

中國專利申請CN102617605A公開了一種頭孢曲松鈉組合物及其制備方法，其披露了通過析晶過程不使用有機溶劑，可控制聚合物雜質的含量并降低過敏反應。但該專利文獻對其含量檢測仍然采用常規檢測方法，自然也無法準確代表樣品中聚合物雜質的真實含量。