[發明專利]一種靶向假體周圍巨噬細胞的CAR-MΦ體內外編輯制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202310372687.0
• 申請日: 2023-04-10
• 公開（公告）號: CN116496413A
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 姜新義;張盛昌;李子陽;付志鵬
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K39/00;A61K39/385;A61K9/107;A61P31/04;C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 孫振家

1.一種嵌合抗原受體，其特征在于，包括胞外結構域、跨膜區、胞內信號傳導結構域；所述胞外結構域前導信號肽段、抗原識別結構域以及鉸鏈區；其中，所述前導信號肽段選自CD8αLeader，所述抗原識別結構域衍生自金黃色葡萄球菌特異性標志物SasA的單克隆抗體。

2.如權利要求1所述嵌合抗原受體，其特征在于，所述抗原識別結構域衍生自SasA單克隆抗體；

或，所述鉸鏈區序列來源于IgG、CD8α或CD28中的一種或多種；進一步的，所述鉸鏈區選自CD8α；

或，所述跨膜區來源于CD4、CD8α，CD28或CD3ζ中的一種或多種；進一步的，所述跨膜結構選自CD8α；

或，所述胞內結構域為信號轉導域來源于FcεRIγ或CD3ζ中的一種或多種，進一步的，所述信號傳導域為CD3ζ。

3.如權利要求1所述嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體的胞外向胞內段依次包括CD8前端信號肽、抗SasA單鏈可變片段、myc-tag標記基因、CD8α鉸鏈區、CD8α跨膜區、CD3ζ信號轉導域、T2A、Puro、P2A與EGFP。

4.權利要求3所述嵌合抗原受體修飾的免疫細胞，其特征在于，所述免疫細胞為巨噬細胞；

所述嵌合抗原受體修飾的巨噬細胞通過基因表達載體實現所述嵌合抗原受體的表達；具體的，所述表達載體為PiggyBac轉座子，含有復制起始位點，3’ITR、5’ITR、以及任選的可選擇的標記；其中嵌合抗原受體部分以CD68為啟動子，編碼第一方面所述嵌合抗原受體的多核苷酸序列；增強胞內殺菌部分以U6為啟動子，編碼CASP11的發卡RNA；

所述嵌合抗原受體修飾的免疫細胞通過納米載體遞送實現巨噬細胞的體內編輯，所述納米載體為脂質納米粒、納米膠束、陽離子脂質體、聚合物PBAE中的一種或多種；進一步的，所述納米載體為納米膠束，通過兩親性聚合物自組裝形成。

5.一種能與權利要求1所述嵌合抗原受體結合的兩親性聚合物，其特征在于，包括親水結構域及疏水結構域，所述親水結構域包括陽離子序列肽、核定位肽(NLS)、巨噬細胞靶向肽(MTS)，所述疏水結構域為硬脂酸(SA)；

優選的，所述核定位肽，其序列為PKKKRKV；所述陽離子序列肽的具體序列為：KRRRR；所述巨噬細胞靶向肽的具體序列為：CRVLRSGSC。

6.一種免疫工程細胞的納米載體，其特征在于，采用權利要求5所述兩親性聚合物作為納米膠束載體負載含有權利要求1-3任一項所述嵌合抗原受體編碼序列的表達載體；

優選的，所述納米載體的構建方法如下：將一定比例的兩親性聚合物與表達載體加入溶液中通過兩親性自組裝形成納米膠束。

7.權利要求1-3任一項所述嵌合抗原受體、權利要求4所述嵌合抗原受體修飾的免疫細胞、權利要求5所述兩親性聚合物、權利要求6所述免疫工程細胞的納米載體在制備抗假體周圍感染藥物或治療多要耐藥菌感染中的應用。