[發(fā)明專利]一種保護(hù)眼部的干細(xì)胞物質(zhì)制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310363852.6
• 申請(qǐng)日: 2023-04-06
• 公開（公告）號(hào): CN116478928A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡武營;胡儲(chǔ)涵;聶莎;杜會(huì)玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西朗泰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;A01N1/02;A61K35/545;A61P27/02
• 代理公司: 天津智行知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12245
• 代理人: 馬小凱

本發(fā)明涉及干細(xì)胞制備領(lǐng)域，具體為一種保護(hù)眼部的干細(xì)胞物質(zhì)制備方法，其包括以下步驟：S1、獲取宿主自身組織；S2、獲取該組織單細(xì)胞并培養(yǎng)擴(kuò)增該單細(xì)胞；S3、通過單細(xì)胞獲取誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞并對(duì)誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增；S4、制備誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞懸浮液；S5、誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞懸浮液低溫保存，使用前室溫自然解凍。本發(fā)明中，誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞可以避免機(jī)體的免疫排斥作用，且因細(xì)胞不取自胚胎，既能大量培育，又不存在倫理性問題。另外，誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞注入眼部后能替代和修復(fù)死亡或受損傷的細(xì)胞，直接起到修復(fù)損傷組織的作用，能從根本上解決眼部出現(xiàn)的各種問題，從而從根本上保護(hù)眼部，使用效果好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及干細(xì)胞制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種保護(hù)眼部的干細(xì)胞物質(zhì)制備方法。

背景技術(shù)

干細(xì)胞治療讓我們看到了未來即使不進(jìn)行器官移植，也能治療許多嚴(yán)重眼病的可能性，目前瞄準(zhǔn)的關(guān)鍵部位包括：角膜，主要是覆蓋眼睛前部的透明組織，有助于聚焦傳入的光線；神經(jīng)視網(wǎng)膜，其中包含光感受器；以及RPE，這是一層色素細(xì)胞，在維持光感受細(xì)胞和血視網(wǎng)膜屏障方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。總而言之，干細(xì)胞療法是通過更換或重建受損的眼睛結(jié)構(gòu)，恢復(fù)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理和功能聯(lián)系，從而恢復(fù)患者的視力。

授權(quán)公告號(hào)為CN113908111A的中國專利公開了一種含臍帶干細(xì)胞外泌體的眼膜貼，采用生物纖維面膜紙具超強(qiáng)的親膚性，擁有能夠貼入皺紋與皮丘深處的包覆能力，且緊貼皮膚不易脫落，提升眼貼膜的吸收性。著重于眼部皮膚的特點(diǎn)，將能激發(fā)皮膚自我更新的細(xì)胞因子與眼貼膜結(jié)合，內(nèi)外兼顧修復(fù)眼部皮膚的干燥、皺紋、眼袋、黑眼圈等問題。該發(fā)明眼膜為乳液型眼膜貼，添加親脂成分，比起水劑型眼膜貼跟滋潤，養(yǎng)護(hù)效果更好。

但是上述已公開方案存在如下不足之處：眼膜貼指標(biāo)不治本，只能起到一些簡單補(bǔ)水、修復(fù)作用，無法對(duì)眼部疾病進(jìn)行治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是針對(duì)背景技術(shù)中存在的市面上大部分眼部干細(xì)胞物質(zhì)都是外用型，指標(biāo)不治本，無法對(duì)眼部疾病進(jìn)行治療的問題，提出一種保護(hù)眼部的干細(xì)胞物質(zhì)制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種保護(hù)眼部的干細(xì)胞物質(zhì)制備方法，包括以下步驟：

S1、獲取宿主自身組織；

S2、獲取該組織單細(xì)胞并培養(yǎng)擴(kuò)增該單細(xì)胞；

S3、通過單細(xì)胞獲取誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞并對(duì)誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增；

S4、制備誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞懸浮液；

S5、誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞懸浮液低溫保存，使用前室溫自然解凍。

優(yōu)選的，S1中，宿主自身組織為皮膚或肌肉組織。

優(yōu)選的，S2中，獲取單細(xì)胞包括以下步驟：S21、通過機(jī)械破碎的方式將組織打碎，切碎組織時(shí)加入含10％FBS的細(xì)胞培養(yǎng)基，避免組織細(xì)胞脫水；S22、利用酶去除細(xì)胞間質(zhì)，使細(xì)胞脫落分散，細(xì)胞間質(zhì)主要為間質(zhì)纖維和間質(zhì)蛋白；S23、過濾篩選，得到需要的單細(xì)胞。

優(yōu)選的，S3中，獲取誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞包括以下步驟：S31、通過病毒介導(dǎo)的方式將若干個(gè)多能性相關(guān)的基因?qū)胨拗骷?xì)胞；S32、將病毒感染后的細(xì)胞種植于飼養(yǎng)層細(xì)胞上，并于胚胎細(xì)胞專用培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，同時(shí)在培養(yǎng)中根據(jù)需要加入相應(yīng)的小分子物質(zhì)以促進(jìn)重編程；S33、出現(xiàn)胚胎干細(xì)胞樣克隆后進(jìn)行誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的鑒定；S34、篩選分離出符合多能干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞，即得到誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞。

優(yōu)選的，S33中，鑒定內(nèi)容包括細(xì)胞形態(tài)、表觀遺傳學(xué)和體外分化潛能。

優(yōu)選的，S4中，誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞懸浮液制備包括以下步驟：S41、對(duì)誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞和培養(yǎng)液的混合體進(jìn)行離心分離，去除培養(yǎng)液；S42、加入5％人白蛋白混懸；S43、加入生理鹽水充分混合得到誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞懸浮液。