[發(fā)明專利]一種保護眼部的干細胞物質(zhì)制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202310363852.6 | 申請日： | 2023-04-06 |
| 公開（公告）號： | CN116478928A | 公開（公告）日： | 2023-07-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 胡武營;胡儲涵;聶莎;杜會玲 | 申請（專利權(quán)）人： | 陜西朗泰生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;A01N1/02;A61K35/545;A61P27/02 |
| 代理公司： | 天津智行知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12245 | 代理人： | 馬小凱 |
| 地址： | 710000 陜西省西安市國*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 保護 眼部 干細胞 物質(zhì) 制備 方法 | ||
1.一種保護眼部的干細胞物質(zhì)制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、獲取宿主自身組織；
S2、獲取該組織單細胞并培養(yǎng)擴增該單細胞；
S3、通過單細胞獲取誘導性多能干細胞并對誘導性多能干細胞進行培養(yǎng)擴增；
S4、制備誘導性多能干細胞懸浮液；
S5、誘導性多能干細胞懸浮液低溫保存，使用前室溫自然解凍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護眼部的干細胞物質(zhì)制備方法，其特征在于，S1中，宿主自身組織為皮膚或肌肉組織。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護眼部的干細胞物質(zhì)制備方法，其特征在于，S2中，獲取單細胞包括以下步驟：S21、通過機械破碎的方式將組織打碎，切碎組織時加入含10％FBS的細胞培養(yǎng)基，避免組織細胞脫水；S22、利用酶去除細胞間質(zhì)，使細胞脫落分散，細胞間質(zhì)主要為間質(zhì)纖維和間質(zhì)蛋白；S23、過濾篩選，得到需要的單細胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護眼部的干細胞物質(zhì)制備方法，其特征在于，S3中，獲取誘導性多能干細胞包括以下步驟：S31、通過病毒介導的方式將若干個多能性相關(guān)的基因?qū)胨拗骷毎籗32、將病毒感染后的細胞種植于飼養(yǎng)層細胞上，并于胚胎細胞專用培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，同時在培養(yǎng)中根據(jù)需要加入相應(yīng)的小分子物質(zhì)以促進重編程；S33、出現(xiàn)胚胎干細胞樣克隆后進行誘導性多能干細胞的鑒定；S34、篩選分離出符合多能干細胞標準的細胞，即得到誘導性多能干細胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的保護眼部的干細胞物質(zhì)制備方法，其特征在于，S33中，鑒定內(nèi)容包括細胞形態(tài)、表觀遺傳學和體外分化潛能。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護眼部的干細胞物質(zhì)制備方法，其特征在于，S4中，誘導性多能干細胞懸浮液制備包括以下步驟：S41、對誘導性多能干細胞和培養(yǎng)液的混合體進行離心分離，去除培養(yǎng)液；S42、加入5％人白蛋白混懸；S43、加入生理鹽水充分混合得到誘導性多能干細胞懸浮液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護眼部的干細胞物質(zhì)制備方法，其特征在于，S5中，誘導性多能干細胞懸浮液保存在-196℃液氮環(huán)境中。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護眼部的干細胞物質(zhì)制備方法，其特征在于，S5中，誘導性多能干細胞懸浮液使用時通過注射的方式注入眼部。
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