[發(fā)明專利]一種用于對(duì)混合體液進(jìn)行鑒定的復(fù)合擴(kuò)增體系、引物及其試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310361860.7
• 申請(qǐng)日: 2023-04-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116287317A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高知梟;梁偉波;肖園園;屈勝秋;陳德智;劉桂宏;鄭亞子;吳秋碩;于在亮;李迎澳;陳初光
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州閱微基因技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 成都正德明志知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51360
• 代理人: 萬(wàn)雪松

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于對(duì)混合體液進(jìn)行鑒定的復(fù)合擴(kuò)增體系、引物及其試劑盒。復(fù)合擴(kuò)增體系包括如SEQ?ID?NO.1～48所示的引物序列，可同時(shí)擴(kuò)增如下STR位點(diǎn)：HBB、HBA、PPBP、HBD、ALAS2、AMI、PRM1、MSMB、KLK3、SEMG1、KLK2、PRM2、HTN3、STATH、MUC7、KRT13、KRT4、SPRR2A、MYOZ1、HBD1、CYP2B7P、β2?MG、UBC以及PGK。本發(fā)明可同時(shí)擴(kuò)增四種人類體液斑(血液、精液、唾液、陰道分泌物)多個(gè)特異標(biāo)記物以及管家基因mRNA，可以快速準(zhǔn)確地進(jìn)行人類特征標(biāo)記物分析，進(jìn)而鑒別法醫(yī)常見(jiàn)體液斑類型，幫助正確識(shí)別案件現(xiàn)場(chǎng)生物檢材的組織來(lái)源。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于法醫(yī)學(xué)檢測(cè)鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于對(duì)混合體液進(jìn)行鑒定的復(fù)合擴(kuò)增體系、引物及其試劑盒。

背景技術(shù)

近十多年來(lái)，在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域DNA分析技術(shù)有助于在罪犯和作案現(xiàn)場(chǎng)之間找到關(guān)聯(lián)證據(jù)，縮小嫌犯范圍，盡管DNA分析方法作為鑒定刑事案件的重要輔助手段已經(jīng)得到普遍認(rèn)可，但由于案件形式的多樣化，僅靠DNA的檢驗(yàn)方法已不能滿足所有刑事案件的需要。而正確識(shí)別現(xiàn)場(chǎng)生物檢材的組織來(lái)源有助于推斷案件的發(fā)生過(guò)程及現(xiàn)場(chǎng)重建，DNA的STR分型檢測(cè)技術(shù)可判定常見(jiàn)的生物檢材如唾液、血液和精液等的個(gè)體來(lái)源，但因DNA的同一性，依靠現(xiàn)有DNA檢測(cè)試劑盒無(wú)法區(qū)分來(lái)自同一個(gè)體的不同體液類型。

不同組織和體液均含有其獨(dú)特的蛋白或酶分子。傳統(tǒng)的法醫(yī)物證學(xué)主要通過(guò)一些酶促反應(yīng)或免疫學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)這些特定蛋白分子，從而篩選和確證各種體液和組織。這些傳統(tǒng)鑒定方法通常比較簡(jiǎn)便、快速，對(duì)血痕、精斑等少數(shù)體液組織具有較高的特異性和準(zhǔn)確性，但亦存在一定局限。首先，部分體液和組織間存在交叉反應(yīng)，使其特異性降低；其次，傳統(tǒng)鑒定方法會(huì)對(duì)檢材造成破壞，且不同組織鑒定方法難以兼容，故需消耗額外的檢材，這對(duì)量少的生物檢材極為不利；再次，因酶蛋白不及DNA穩(wěn)定，致使陳舊或腐敗降解檢材檢測(cè)困難。此外，傳統(tǒng)方法結(jié)果判定大多依賴操作者的水平和經(jīng)驗(yàn)，增加了人為因素造成誤判的風(fēng)險(xiǎn)。

目前，法醫(yī)學(xué)對(duì)組織來(lái)源鑒定廣泛使用的分子標(biāo)志主要有信使RNA(messengerRNA，mRNA)、微RNA(MicroRNA，miRNA)、DNA甲基化三種；此外，微生物菌群也可用于體液來(lái)源鑒定。因此針對(duì)體液斑類型的檢測(cè)主要有下列幾種方法：

1.微小RNA分析法

微小RNA(microRNAs，miRNAs)是一類內(nèi)源性的非編碼小分子RNA，長(zhǎng)度范圍在16-29nt，平均長(zhǎng)度22nt，廣泛存在于各種真核細(xì)胞中。miRNAs通過(guò)直接剪切靶mRNA，或者通過(guò)完全/不完全與靶mRNAs3'非翻譯區(qū)互補(bǔ)結(jié)合抑制靶mRNA的翻譯，從而參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、分化、凋亡、衰老、疾病及腫瘤的發(fā)生，被譽(yù)為基因表達(dá)的“調(diào)節(jié)器”。現(xiàn)已證實(shí)，不同體液和組織間miRNAs表達(dá)存在差異，致使miRNAs成為法醫(yī)學(xué)組織來(lái)源鑒定新的分子工具。

有研究顯示，miRNAs不僅能抵抗RNA酶的降解，而且在加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或溫度極端改變時(shí)，其含量和分子結(jié)構(gòu)亦無(wú)明顯改變，加之miRNAs分子很小，因此與采用mRNA進(jìn)行組織/體液鑒定相比，miRNAs檢測(cè)的最大優(yōu)勢(shì)是靈敏度和穩(wěn)定性更高。但應(yīng)注意的是，miRNA的表達(dá)是相對(duì)表達(dá)，其檢測(cè)依賴RT-PCR，結(jié)果難以標(biāo)準(zhǔn)化。

2.組織差異性甲基化分析法