[發明專利]一種低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310348957.4
• 申請日: 2023-04-04
• 公開（公告）號: CN116496983A
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 張翠萍;褚自強;張文華;付小兵
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61P3/10;A61P17/02
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 戴嵩瑋

本發明提供了一種低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體及其制備方法和應用，屬于生物醫學技術領域。本發明提供了一種低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體的制備方法，包括：將人臍帶間充質干細胞在低氧環境中進行培養，得到細胞培養液；所述低氧環境的氧氣體積百分含量為0.5％～1.5％；將培養得到的人臍帶間充質干細胞進行差速超速離心，得到低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體。本發明利用低氧誘導制備外泌體的方法得到的外泌體用于糖尿病創面，其對糖尿病創面的治療效果顯著優于常氧條件下制備的外泌體，不僅在愈合速度上更具有優勢，同時在刺激皮膚附屬器再生和提升愈合質量方面具有更大應用潛力。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體及其制備方法和應用。

背景技術

難愈合創面是糖尿病的嚴重并發癥之一，嚴重影響著患者的生活質量甚至于生命健康。在這一機體高糖環境下，皮膚作為人體的保護屏障，處于嚴重的代謝紊亂狀態。開發具有潛在應用價值且安全的糖尿病創面愈合治療方法具有重要價值。

外泌體是細胞外分泌的微小囊泡，具有脂質雙層膜結構，包含有蛋白質、DNA和RNA等各種小分子活性成分。外泌體作為旁分泌途徑之一，可作為載體將其內容物通過融合細胞膜或者胞吞作用運輸至靶細胞內，從而發揮有效生物學效應。相比于藥物、小分子材料和干細胞治療等，干細胞來源的外泌體具有更好的生物安全性和組織相容性。隨著愈來愈多的疾病治療需求，外泌體質量穩定，且適合大規模提取，在臨床上應用更加安全。目前應用于糖尿病創面修復的外泌體的效果往往較差。

發明內容

針對現有技術中的缺陷，本發明的目的在于提供一種低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體的制備方法，所述制備方法能夠高效應用于糖尿病創面修復。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

本發明提供了一種低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體的制備方法，包括以下步驟：

將人臍帶間充質干細胞在低氧環境中進行培養，得到細胞培養液；所述低氧環境的氧氣體積百分含量為0.5％～1.5％；

對所述細胞培養液進行外泌體的提取，得到低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體。

優選的，所述培養用的培養基包括高糖DMEM培養基；所述高糖DMEM培養基中含有5％～10％的無外泌體血清。

優選的，所述培養的時間為36～48h；所述培養的溫度為37℃。

優選的，所述提取的步驟包括：

將細胞培養液進行低速離心，取上清得到第一懸浮液；

將所述第一懸浮液進行中速離心，取上清得到第二懸浮液；

將所述第二懸浮液過濾后，進行高速離心，取沉淀進行重懸，再次進行高速離心后再次重懸，得到低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體懸液。

優選的，所述低速離心的轉速為1000～2000g；所述低速離心的時間為5～10min；

所述中速離心的轉速為10,000～20,000g；所述中速離心的時間為20～30min；

所述高速離心的轉速為100,000～200,000g；所述高速離心的時間為75～90min。

優選的，所述過濾用濾膜的孔徑為0.22μm；所述重懸的試劑包括無菌PBS緩沖液；所述無菌PBS緩沖液的pH為7.2～7.4。

優選的，所述人臍帶間充質干細胞包括傳代2～4次得到的人臍帶間充質干細胞。

本發明提供了一種上述技術方案所述制備方法制備得到的低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體。