[發明專利]一種低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310348957.4
• 申請日: 2023-04-04
• 公開（公告）號: CN116496983A
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 張翠萍;褚自強;張文華;付小兵
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61P3/10;A61P17/02
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 戴嵩瑋

1.一種低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將人臍帶間充質干細胞在低氧環境中進行培養，得到細胞培養液；所述低氧環境的氧氣體積百分含量為0.5％～1.5％；

對所述細胞培養液進行外泌體的提取，得到低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述培養用的培養基包括高糖DMEM培養基；所述高糖DMEM培養基中含有5％～10％的無外泌體血清。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述培養的時間為36～48h；所述培養的溫度為37℃。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述提取的步驟包括：

將細胞培養液進行低速離心，取上清得到第一懸浮液；

將所述第一懸浮液進行中速離心，取上清得到第二懸浮液；

將所述第二懸浮液過濾后，進行高速離心，取沉淀進行重懸，再次進行高速離心后再次重懸，得到低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體懸液。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述低速離心的轉速為1000～2000g；所述低速離心的時間為5～10min；

所述中速離心的轉速為10,000～20,000g；所述中速離心的時間為20～30min；

所述高速離心的轉速為100,000～200,000g；所述高速離心的時間為60～90min。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述過濾用濾膜的孔徑為0.22μm；所述重懸的試劑包括無菌PBS緩沖液；所述無菌PBS緩沖液的pH為7.2～7.4。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述人臍帶間充質干細胞包括傳代2～4次得到的人臍帶間充質干細胞。

8.權利要求1～7任一項所述制備方法制備得到的低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體。

9.權利要求8所述低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體制備miR-17-5p高表達的試劑。

10.權利要求8所述低氧誘導的人臍帶間充質干細胞外泌體在制備促進糖尿病創面愈合藥物中的應用。