[發(fā)明專利]一種從梅花鹿糞便中提取宿主核基因組DNA的方法及其應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202310336067.1 | 申請日： | 2023-03-31 |
| 公開（公告）號： | CN116179541A | 公開（公告）日： | 2023-05-30 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張陽;黃曉鳳;韓衛(wèi)杰;張?zhí)煜?/a>;張曼玉 | 申請（專利權）人： | 江西省林業(yè)科學院 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 南昌大牛知識產權代理事務所(普通合伙) 36135 | 代理人： | 劉俊文 |
| 地址： | 330000 江西省南昌*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 梅花鹿 糞便 提取 宿主 基因組 dna 方法 及其 應用 | ||
1.一種從梅花鹿糞便中提取宿主核基因組DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1：將梅花鹿糞便樣品置于無水乙醇中，然后進行離心震蕩洗脫20s～40s，得到洗脫液；
步驟2：向洗脫液中加入濃度為3M-5M的醋酸鈉溶液，洗脫液和醋酸鈉溶液的體積比為1mL：0.05mL-0.1mL，混勻，離心，得到富集的梅花鹿腸壁細胞及破碎腸壁細胞釋放的宿主DNA；
步驟3：向富集的梅花鹿腸壁細胞及破碎腸壁細胞釋放的宿主DNA加入75％乙醇清洗，離心，干燥，得到收集物；
步驟4：使用微量DNA提取試劑盒從收集物中提取梅花鹿核基因組DNA。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，微量DNA提取試劑盒組分包括BufferGL、ProteinaseK和RNaseA。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，BufferGL、ProteinaseK和RNaseA的用量比例為180μL：20μL：10μL。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1中梅花鹿糞便樣品和無水乙醇的用量比例為1g：2mL。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，醋酸鈉溶液的濃度為5M。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，洗脫液和醋酸鈉溶液的體積比為1mL：0.05mL。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中離心的速率為12000rpm，離心的時間為10min。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3中離心的速率為12000rpm，離心的時間為1min。
9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3中向富集的梅花鹿腸壁細胞及破碎腸壁細胞釋放的宿主DNA加入預冷-20℃的75％乙醇清洗，離心，干燥，得到收集物。
10.一種權利要求1-9任一項所述的方法在草食性哺乳動物糞便提取宿主細胞核基因組DNA中的應用。
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