[發明專利]一種具核梭桿菌外膜囊泡的提取純化方法及應用

在審

• 申請號: 202310326687.7
• 申請日: 2023-03-30
• 公開（公告）號: CN116240145A
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 權春善;張麗影;張旭強;鄭維;王豫鑫;范若辰;葛樹愛;吳亞芳;胡展馳
• 申請（專利權）人: 大連民族大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;A61K39/40;A61K35/74;A61P35/00;A61P29/00;C12R1/01
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理有限公司 11562
• 代理人: 陳月霞

1.一種具核梭桿菌外膜囊泡的提取純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

a.取具核梭桿菌菌種進行培養，獲得菌液；

b.取菌液第一次離心，過濾得上清液，濃縮濾液，將濃縮后的濾液第二次離心，去掉上清液，重懸沉淀后獲得粗提的外膜囊泡；

c.制作碘克沙醇密度梯度離心液，濃度由上至下依次增大，最上層加入粗提的外膜囊泡，進行密度梯度離心純化，即得純化后的外膜囊泡。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a中所述培養為將具核梭桿菌菌種加入到30mLTSB培養基中，37℃培養9h，獲得種子液；取330mL?TSB培養基，按1％接種種子液，充氮氣5min，37℃培養40h。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟b中所述過濾為將上清液通過0.22μm水系膜過濾；所述濃縮為利用中空纖維膜濃縮濾液。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟b中所述第一次離心為4℃，8500rpm離心25min；所述第二次離心為4℃，200000×g離心4h。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c中所述碘克沙醇密度梯度離心液的具體制作方法為將碘克沙醇離心液用含0.85wt％NaCl的30mM?HEPS緩沖液稀釋，分別得到體積濃度為40％、35％、30％、25％、20％、15％的稀釋液。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟c中所述密度梯度離心條件為4℃，35000×g離心16h。

7.一種如權利要求1-6任一項所述方法獲得的具核梭桿菌外膜囊泡。

8.一種如權利要求7所述具核梭桿菌外膜囊泡在制備促進釋放促炎因子藥物中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述促炎因子包括白細胞介素IL-8。

10.一種如權利要求7所述具核梭桿菌外膜囊泡在制備降低具核梭桿菌對結直腸癌細胞黏附作用的藥物中的應用。