[發明專利]靶向CD47和PCSK9的重組融合蛋白及應用

在審

• 申請號: 202310322718.1
• 申請日: 2023-03-30
• 公開（公告）號: CN116478299A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 章旭耀;鞠佃文;馮美卿;徐彩莉;薛文婧
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;A61K39/00;A61P35/00;G01N33/574
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 楊元焱

本發明涉及一種靶向CD47和PCSK9的重組融合蛋白及應用，該重組融合蛋白包括信號調節蛋白α胞外結構域(SIRPα)和抗PCSK9抗體，通過與腫瘤細胞表面的CD47分子結合，阻斷其向巨噬細胞傳遞信號，解除其對巨噬細胞吞噬功能的抑制，促進巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬殺傷，同時通過與腫瘤微環境中的PCSK9結合，提高巨噬細胞提呈腫瘤抗原的能力。該重組融合蛋白同時促進了巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬和抗原提呈能力，從而增強抗腫瘤治療效果。該重組融合蛋白可用于各類惡性腫瘤的臨床治療。

技術領域

本發明涉及生物藥物技術領域，尤其是涉及一種靶向CD47和PCSK9的重組融合蛋白及應用。

背景技術

CD47(又名整合素相關蛋白，integrin-associated?protein，IAP)是一種在腫瘤細胞的細胞膜上廣泛表達的高度糖基化跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員，CD47的配體主要為信號調節蛋白α(signal?regulated?protein?alpha，SIRPα)，其在巨噬細胞等髓系細胞膜上高表達，其分子結構包括一個N端Ig樣胞外結構域、五個跨膜結構域和一個C端的細胞內信號序列；其中Ig樣胞外結構域包括一個N末端的和CD47結合的可變區(第一Ig樣胞外結構域)和兩個C1型的Ig樣結構域。SIRPα與CD47相結合后引發細胞內一系列級聯反應抑制細胞的吞噬作用。腫瘤細胞通過高表達CD47與巨噬細胞表面SIRPα相互作用，向巨噬細胞傳達“別吃我”信號來逃避固有免疫系統的監視與攻擊，從而促進腫瘤生存與發展^[1]。目前靶向CD47的藥物研究主要為利用抗CD47單克隆抗體、抗CD47納米抗體、SIRPα蛋白或SIRPα-Fc融合蛋白阻斷CD47與SIRPα的結合，從而解除對固有免疫系統的抑制作用^[2]。研究表明，在抗CD47抗體作用下，巨噬細胞吞噬腫瘤細胞后能夠在一定程度上呈遞腫瘤抗原并激活T細胞免疫應答^[3]。但是，阻斷CD47的免疫療法也存在一定的缺陷，如，在部分腫瘤中響應率低，抗腫瘤效應易受腫瘤微環境的影響而被削弱，不能充分地激活適應性免疫系統，抗腫瘤療效有限且不持久等。因此，亟需探究靶向CD47治療腫瘤過程中的調控機制，進一步開發新的治療藥物以提高免疫細胞抗腫瘤免疫反應。

前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin9型(proprotein?convertase?subtilisin/kexin?type?9，PCSK9)是前蛋白轉化酶家族的第9個成員，是一種絲氨酸蛋白酶，在正常人體內主要由肝臟表達和分泌。PCSK9通過與細胞膜上低密度脂蛋白受體(LDL-R)結合并介導LDL-R內吞降解，從而降低LDL-R與低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)結合并轉運LDL-C進入細胞的能力，導致血液LDL-C水平升高^[4]。有研究報道了PCSK9在腫瘤發生發展中也起到一定的作用，PCSK9能夠與腫瘤細胞表面主要組織相容性復合體(MHC-I)相互作用并介導MHC-I內吞降解，導致腫瘤細胞不能充分呈遞自身抗原，進而抑制了對CD8⁺T細胞的活化和抗腫瘤免疫反應^[5]。然而，PCSK9對于腫瘤免疫治療中固有免疫細胞的影響仍不清楚。已經開發出的靶向PCSK9的藥物主要有小分子抑制劑和單克隆抗體(Alirocumab和Evolocumab)。

目前靶向CD47和靶向PCSK9的藥物均只有有限的抗腫瘤活性；迄今，尚未見同時靶向CD47與PCSK9的聯合治療或單分子藥物的報道，而本發明滿足該需要。

參考文獻：

[1]Zhao?H,Song?S,Ma?J,Yan?Z,Xie?H,Feng?Y,Che?S.CD47?as?a?promisingtherapeutic?target?in?oncology.Front?Immunol.2022Aug?22；13:757480.