[發明專利]用于生產谷氨酸的大腸桿菌基因工程菌及構建方法與應用

在審

• 申請號: 202310301025.4
• 申請日: 2023-03-27
• 公開（公告）號: CN116426449A
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 徐慶陽;王銳麒;陳志超
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/53;C12N15/60;C12N15/52;C12N15/70;C12N15/113;C12P13/18;C12R1/19
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 李蕊

1.一種用于生產谷氨酸的大腸桿菌基因工程菌，其特征在于：是利用代謝工程改造野生型E.col?i?MG1655得到的：敲除aceA基因，并在該位點整合了使用P_j23105啟動子控制表達的Icd基因；和/或敲除了glnA基因，并在該位點整合了使用P_trc啟動子控制表達的gdha基因；和/或敲除了rph假基因位點，并在該位點整合了使用P_j23110啟動子控制表達的xfp基因；和/或敲除了sucA、sucB基因原有的啟動子，使用P_j23117啟動子控制sucA、sucB基因共同表達。

2.根據權利要求1所述的用于生產谷氨酸的大腸桿菌基因工程菌，其特征在于：所述gdhA基因來源于谷氨酸棒桿菌；所述xfp基因來源于青春雙歧桿菌；所述Icd、aceA、glnA、sucA、sucB、rph基因均為大腸桿菌自身來源基因。

3.根據權利要求1所述的用于生產谷氨酸的大腸桿菌基因工程菌，其特征在于：

P_j23105啟動子具有序列表SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列；

P_j23110啟動子具有序列表SEQ?ID?NO.2所示核苷酸序列；

P_j23117啟動子具有序列表SEQ?ID?NO.3所示核苷酸序列；

P_trc啟動子具有序列表SEQ?ID?NO.4所示核苷酸序列；

Icd基因具有序列表SEQ?ID?NO.5所示核苷酸序列；

gdhA基因具有序列表SEQ?ID?NO.6所示核苷酸序列；

xfp基因具有序列表SEQ?ID?NO.7所示核苷酸序列。

aceA基因具有序列表SEQ?ID?NO.8所示核苷酸序列。

glnA基因具有序列表SEQ?ID?NO.9所示核苷酸序列。

sucA基因具有序列表SEQ?ID?NO.10所示核苷酸序列。

sucB基因具有序列表SEQ?ID?NO.11所示核苷酸序列。

4.權利要求1所述用于生產谷氨酸的大腸桿菌基因工程菌的構建方法，其特征在于：通過定向改造方法得到生產菌株，具體為：利用代謝工程改造方法調整Icd、aceA、glnA、sucA、sucB基因的表達強度，并引入了外源基因gdhA、xfp，其中：

(1)在aceA基因位點使用P_j23105啟動子控制lcd基因過表達；

(2)在glnA基因位點使用P_trc啟動子控制gdhA基因過表達；

(3)在rph假基因位點使用P_J23110啟動子控制xfp基因表達；

(4)敲除了串聯基因sucA、sucB的原有啟動子，使用Pj23117啟動子控制sucA、sucB基因共同表達。

5.根據權利要求4所述的用于生產谷氨酸的大腸桿菌基因工程菌的構建方法，其特征在于：所述代謝工程改造方法為CRISPR-Cas9基因編輯技術。

6.權利要求1所述大腸桿菌基因工程菌在生產谷氨酸方面的應用。