[發明專利]一種鑒定耐草劑玉米的引物組、試劑盒及其方法

在審

• 申請號: 202310299639.3
• 申請日: 2023-03-20
• 公開（公告）號: CN116219065A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 何軍光;周駿;樓億圓;苗昱婷;李焰;任鑫;李靜靜;張凌燕;任志勇;顧偉航;陸建明
• 申請（專利權）人: 浙江新安化工集團股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6869;C12N15/00
• 代理公司: 北京秉文同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11859
• 代理人: 陳少麗;孫富利

本發明提供了一種鑒定耐草劑玉米的引物組、試劑盒及其方法。所述引物組包括：第一引物對和第二引物對中的至少一對，所述第一引物對包括第一引物和第二引物，所述第一引物的序列如序列表中SEQ?ID?NO：1所示，所述第二引物的序列如序列表中SEQ?ID?NO：2所示，所述第二引物對包括第三引物和第四引物，所述第三引物的序列如序列表中SEQ?ID?NO：3所示，所述第四引物的序列如序列表中SEQ?ID?NO：4所示。本發明實施例提供了一種鑒定耐除草劑玉米的引物組、試劑盒及其方法，該引物組和試劑盒對檢測耐除草劑玉米具有較高的靈敏度和特異性，該鑒定方法能夠準確鑒定出耐除草劑玉米，且檢測過程簡單，效率高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，更具體地，涉及鑒定耐草劑玉米的引物組、試劑盒及其方法。

背景技術

玉米是世界上種植最廣泛的農作物之一。玉米也是我國種植面積最廣的農作物。隨著植物基因工程的發展，通過導入外源基因來進行遺傳改造成為遺傳育種的主要手段之一。抗除草劑玉米可以大幅度降低防治雜草所需要的農業勞動力，降低勞動力的投入，減少雜草對玉米產量的影響。隨著人們對健康越來越重視，使得人們越來越關注農作物是否含有轉基因成分。am79epsps基因能夠賦予植物對除草劑草甘膦的耐受性。插入am79?epsps基因的耐草劑玉米WYN17132是將am79epsps基因根據玉米密碼子偏好性特征進行優化，獲得的耐除草劑玉米，除草劑耐受性性能優異。

根據轉基因插入片段的旁側序列設計轉化體特異的檢測是目前最為有效的轉基因檢測方法。常用的轉基因植物外源插入載體旁側序列檢測方法包括外源接頭介導PCR。但是，該方法循環過程復雜，從而降低了檢測效率，并不利于檢測。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種鑒定耐草劑玉米的引物組、試劑盒及其方法，該方法能夠準確能夠準確鑒定耐草劑玉米，且檢測過程簡單，效率高。

本發明實施例提供一種鑒定耐草劑玉米的引物組，所述引物組包括：第一引物對和第二引物對中的至少一對，所述第一引物對包括第一引物和第二引物，所述第一引物的序列如序列表中SEQ?ID?NO：1所示，所述第二引物的序列如序列表中SEQ?ID?NO：2所示，所述第二引物對包括第三引物和第四引物，所述第三引物的序列如序列表中SEQ?ID?NO：3所示，所述第四引物的序列如序列表中SEQ?ID?NO：4所示。

另一方面，本發明實施例提供了一種鑒定耐草劑玉米的試劑盒，所述試劑盒包括：如權利要求1所述的引物組，所述試劑盒還包括：DNA聚合酶和dNTP。

具體地，所述第一引物、所述第二引物、所述第三引物、所述第四引物的終濃度均為0.25μM。

又一方面，本發明實施例提供了一種鑒定耐草劑玉米的方法，所述方法包括：

獲得待測玉米的基因組DNA；

將所述基因組DNA進行酶切，得到酶切片段；

將所述酶切片段進行環化，得到環化基因組DNA；

以所述環化基因組DNA為模板，采用反向PCR引物組進行2輪PCR擴增，得到反向PCR擴增產物；

將所述反向PCR產物進行測序，并與參考基因組進行比對，確定外源插入序列的插入位點，確定外源插入序列兩側的旁側序列；

以所述基因組DNA為模板，采用測序引物進行擴增，得到PCR擴增產物，將產物測序，驗證所述產物序列是否與所述旁側序列和所述外源插入序列一致；

若所述產物序列與所述旁側序列和所述外源插入序列一致，則根據所述旁側序列，以所述基因組DNA為模板，采用如權利要求1所述的引物組進行擴增，得到PCR產物，將所述PCR產物與所述預期的DNA片段進行比對，若所述PCR產物與所述預期的DNA片段一致，則鑒定為耐草劑玉米WYN17132。