[發(fā)明專利]用于檢測肺腺癌的標(biāo)記物、引物組以及試劑盒

在審

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• 申請日: 2023-03-23
• 公開（公告）號: CN116144781A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉忠祥;孫關(guān);孫知曉
• 申請（專利權(quán)）人: 劉忠祥
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 蘇州九方專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32398
• 代理人: 張文婷

本發(fā)明提供了用于檢測肺腺癌的標(biāo)記物、引物組以及試劑盒。本發(fā)明提供了用于篩查肺腺癌的標(biāo)記物miR?4433a?3p熒光定量PCR引物，單獨使用血清miR?4433a?3p診斷區(qū)分良性肺腺癌結(jié)節(jié)與惡性肺腺癌結(jié)節(jié)，ROC曲線下面積AUC為0.9750；單獨使用胸腔積液miR?4433a?3p診斷區(qū)分良性肺腺癌結(jié)節(jié)與惡性肺腺癌結(jié)節(jié)，ROC曲線下面積AUC為0.9375；單獨使用血清miR?4433a?3p評估惡性肺結(jié)節(jié)患者術(shù)后臨床效果差異顯著。因此，血清miR?4433a?3p可以用于制備肺腺癌結(jié)節(jié)、及評估術(shù)后臨床效果的診斷試劑盒，胸腔積液miR?4433a?3p也可以用于制備肺腺癌結(jié)節(jié)的診斷試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及用于檢測肺腺癌的標(biāo)記物、引物組以及試劑盒。

背景技術(shù)

肺腺癌發(fā)病率逐年增長，已經(jīng)成為NSCLC中最常見的亞型，幾乎占全部肺癌的50％，且總體生存率較低。由于肺腺癌早期沒有典型的臨床表現(xiàn)，僅見孤立的肺結(jié)節(jié)，或者肺部病灶較小但存在惡性胸腔積液等并發(fā)癥，此時發(fā)現(xiàn)時已是中晚期，難以得到有效治療。而針對早期肺癌及胸腔積液的診斷及治療可以明顯提高患者的5年生存率。

雖然大部分肺結(jié)節(jié)為良性病變，僅需隨診，不需進一步治療，但仍有相當(dāng)數(shù)量的肺結(jié)節(jié)為早期惡性病變。但肺結(jié)節(jié)的定性診斷仍較困難，可能與惡性結(jié)節(jié)缺乏特異性表現(xiàn)有關(guān)。另外對于結(jié)節(jié)大于2cm的T1c期肺腺癌患者切除術(shù)后，肺癌復(fù)發(fā)率明顯。如果能夠有一種檢測手段對肺腺癌患者可以早期診斷，評估手術(shù)切除的療效，判斷復(fù)發(fā)的可能性，可大大提高患者的生命質(zhì)量。

據(jù)病因?qū)W，可將胸腔積液大致分為良性胸膜疾病與惡性疾病，肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移在惡性胸腔積液中所占比例較大，患者預(yù)期壽命因胸腔積液的出現(xiàn)將顯著縮短。胸膜活檢是診斷胸膜病變的首選方法，但存在操作難度大，高風(fēng)險，易產(chǎn)生氣胸等并發(fā)癥的缺點。而許多腫瘤標(biāo)志物如肺表面活性蛋白A，癌胚抗原等都曾被用于肺腺癌惡性胸腔積液的鑒別診斷，但其敏感性及特異性都較低，難以滿足臨床的需要。

目前病理檢查依舊是診斷肺腺癌的金標(biāo)準(zhǔn)。新版WHO肺腫瘤組織學(xué)以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，對肺腺癌活檢和細(xì)胞學(xué)小標(biāo)本的病理診斷要求更加明確。因此，取得合格的病理組織對肺腺癌的早期診斷非常重要。當(dāng)常規(guī)方法不能準(zhǔn)確診斷時，應(yīng)考慮更多侵入性的手術(shù)方法如縱隔鏡、縱隔切開術(shù)、電視輔助胸腔鏡手術(shù)、纖維支氣管鏡檢查等。然而上述檢查創(chuàng)傷大，費用高，檢測周期長，部分操作對患者心肺功能要求高，從而限制了適應(yīng)人群。

因此需要進一步探索一種新的生物標(biāo)志物可在以提高肺腺癌的早期診斷。該生物標(biāo)記物需滿足：痛苦少，風(fēng)險小，易操作，無創(chuàng)，快速，低成本，靈敏度、特異性高，可重復(fù)的特點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供了用于檢測肺腺癌的標(biāo)記物、引物組以及試劑盒。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一目的是提供一種用于檢測肺腺癌的標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為miR-4433a-3p，人源miR-4433a-3p的成熟體核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

本發(fā)明的第二目的是提供一種用于檢測肺腺癌標(biāo)記物miR-4433a-3p的引物組，所述檢測引物對的正向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；反向引物的核苷酸序列如SEQID?NO：3所示；所述內(nèi)參引物對的正向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示；反向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示。

本發(fā)明的第三目的是提供上述的引物組在制備檢測肺腺癌結(jié)節(jié)的試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四目的是提供上述的引物組在制備檢測肺腺癌胸腔積液的試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第五目的是提供上述的引物組在制備檢測肺腺癌術(shù)后評估的試劑盒中的應(yīng)用。