[發(fā)明專利]用于檢測肺腺癌的標記物、引物組以及試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202310286796.0 | 申請日： | 2023-03-23 |
| 公開（公告）號： | CN116144781A | 公開（公告）日： | 2023-05-23 |
| 發(fā)明（設計）人： | 劉忠祥;孫關(guān);孫知曉 | 申請（專利權(quán)）人： | 劉忠祥 |
| 主分類號： | C12Q1/6886 | 分類號： | C12Q1/6886;C12N15/113 |
| 代理公司： | 蘇州九方專利代理事務所(特殊普通合伙) 32398 | 代理人： | 張文婷 |
| 地址： | 224008 江蘇省鹽城市鹽都區(qū)人民南*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 檢測 腺癌 標記 引物 以及 試劑盒 | ||
1.一種用于檢測肺腺癌的標記物，其特征在于，所述標記物為miR-4433a-3p，人源miR-4433a-3p的成熟體核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。
2.一種用于檢測肺腺癌標記物miR-4433a-3p的引物組，其特征在于，所述引物組包括檢測引物對和內(nèi)參引物對，所述檢測引物對的正向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；反向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示；所述內(nèi)參引物對的正向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示；反向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示。
3.如權(quán)利要求2所述的引物組在制備檢測肺腺癌結(jié)節(jié)的試劑盒中的應用。
4.如權(quán)利要求2所述的引物組在制備檢測肺腺癌胸腔積液的試劑盒中的應用。
5.如權(quán)利要求2所述的引物組在制備檢測肺腺癌術(shù)后評估的試劑盒中的應用。
6.一種用于非診斷和治療目的的檢測如權(quán)利要求1中所述的標記物miR-4433a-3p的方法，其特征在于，所述方法包括以下具體步驟：
S1、血液樣本或胸腔積液樣本收集及處理；
S2、采用trizol法提取總RNA；
S3、RNA定量及逆轉(zhuǎn)錄；
S4、miR-4433a-3p定量分析，包括定量實時qRT-PCR反應和數(shù)據(jù)分析。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述定量實時qRT-PCR法以U6為內(nèi)參。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，miR-4433a-3p的PCR擴增體系總體積為20μL，包括PCR?mix?10μL；引物0.4μL；ddH2O?3μL；已稀的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物1μL。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述定量實時qRT-PCR的反應程序為預變性1次，95℃保持5min；循環(huán)反應40次，95℃保持10sec，60℃保持30sec；融解1次，95℃保持15sec，60℃保持60sec，95℃保持15sec。
10.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增體系中所述檢測引物的終濃度為0.2μM，所述內(nèi)參引物的終濃度為0.2μM。
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