[發明專利]多肽PYRAE、其制備方法及作為BiP抑制劑在制備抗癌藥物中的應用

在審

• 申請號: 202310284647.0
• 申請日: 2023-03-22
• 公開（公告）號: CN116102618A
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: 李魯遠;劉承主;張智松;龍輝;鄭鑫玲
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/16;C07K1/13;C07K1/06;C07K1/04;C09K11/06;A61K38/08;A61P35/00;G01N21/64
• 代理公司: 天津心知意達知識產權代理事務所(普通合伙) 12260
• 代理人: 趙佳

本發明提供了一種多肽PYRAE、其制備方法及作為BiP抑制劑在制備抗癌藥物中的應用。所述多肽PYRAE具有跟BiP結合并抑制它的ATPase活性的能力；水溶性好，分子量小，在2小時之內就能夠進入腫瘤細胞內質網內部，能夠引起內質網應急而導致細胞凋亡；無細胞毒性；抑制4T1BALB/c雌鼠的乳腺癌生長；該多肽可作為BiP抑制劑發揮抗腫瘤活性，具有較大的臨床應用和開發價值。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，尤其是涉及一種多肽PYRAE、其制備方法及作為BiP抑制劑在制備抗癌藥物中的應用。

背景技術

癌癥已經成為世界上最可怕的疾病之一。尤其是癌癥的發病率和多樣性的增加，以及人類的老齡化，使得癌癥的預防和治療越來越困難。對癌癥治療的研究已經進行了幾十年，但科學家們仍然沒有能夠針對許多類型的腫瘤開發出有效的治療方法。

結合免疫球蛋白蛋白(BiP)，稱為HSPA5或GRP78，是Hsp70家族的分子伴侶蛋白。大部分分布在于內質網(ER)中，很少部分分布在細胞核、細胞表面和細胞質中。作為UPR中的關鍵調節因子，BiP在ER蛋白平衡中發揮重要作用，以支持細胞存活和生長。未折疊或錯誤折疊的蛋白質通常發生在細胞中，如果不加以處理，可以形成有毒的蛋白質聚集物。特別是在癌細胞中，新蛋白質的合成更加瘋狂，產生更多的未折疊或者錯折疊蛋白質。所以癌細胞需要更強的UPR和BiP蛋白才能存活以及生長。抑制BiP可破壞UPR，破壞ER蛋白穩態，導致癌細胞死亡。BiP通過調節ER蛋白平衡和抑制細胞凋亡的能力促進癌細胞的耐藥性。BiP具有ATPase活性并且BiP的功能就跟其ATPase活性有密切的關系。BiP失去其ATPase活性就不能發揮自己的分子伴侶作用。綜上所述，抑制BiP能夠抑制腫瘤生長，克服治療耐藥性。近年來，開發新型BiP抑制劑的研究已成為眾多科學家關注的焦點。有幾個屬于化學分子的BiP抑制劑已經開發出來了，但抑制BiP的天然蛋白模擬肽尚未發現。

近年來，具有抗腫瘤活性的天然生物活性肽藥物引起了許多科學家們的興趣。這些藥物因有高靶向性、低細胞毒性、高滲透性而成為癌癥治療的潛在發展方向。該領域大致分為兩個領域:從天然資源分離或者加工出來的生物活性肽和利用現代生物化學技術合成出來的模擬肽。天然來源的生物活性肽存在著來源有限、成本高、對技術和設備要求高等的缺點。由幾個到幾百個氨基酸合成的天然模擬肽因其適應癥廣、安全性高、療效顯著而成為近年來藥物開發的重要熱點之一，已在癌癥、艾滋病、糖尿病、肝炎等疾病的治療中受到了廣泛的歡迎。隨著現代技術和設備的飛速發展，模擬肽的生產成本大大降低，模擬肽藥物也進入了黃金發展階段。

發明內容

有鑒于此，為解決上述問題，本發明提出了一種能夠抑制BiP的ATPase活性，減弱BiP的處理未折疊或錯折疊蛋白的功能，導致內質網應急和細胞凋亡，抑制腫瘤生長的多肽PYRAE，并提供了其制備方法和其作為BiP抑制劑在制備抗癌藥物中的應用；所述多肽PYRAE水溶性好，分子量小，容易進入細胞內部，不產生細胞毒性。

為達到上述目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

本發明一方面提供了一種多肽PYRAE，其水溶性好，分子量小(634Da)，其結構式如下：

本發明再一方面提供了一種多肽PYRAE的制備方法，包括如下步驟：

S1、在固相合成器中將Fmoc-E(Trt)-OH連接在2-氯三苯甲基氯樹脂上，用二氯甲烷作為溶劑進行固相合成反應，后抽干二氯甲烷；

S2、用DMF洗滌多次，用20％哌啶脫Fmoc，顏色為藍色則脫好，脫好后，用DMF洗滌多次，接著投放Fmoc-A(pbf)-OH、多肽縮合劑HBTU、HOBT、N-甲基嗎啡啉、DMF于固相合成器中固相合成反應；