[發(fā)明專利]多肽PYRAE、其制備方法及作為BiP抑制劑在制備抗癌藥物中的應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202310284647.0
• 申請日: 2023-03-22
• 公開（公告）號: CN116102618A
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李魯遠(yuǎn);劉承主;張智松;龍輝;鄭鑫玲
• 申請（專利權(quán)）人: 南開大學(xué)
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/16;C07K1/13;C07K1/06;C07K1/04;C09K11/06;A61K38/08;A61P35/00;G01N21/64
• 代理公司: 天津心知意達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12260
• 代理人: 趙佳

1.多肽PYRAE，其結(jié)構(gòu)式如下：

2.多肽PYRAE的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、將Fmoc-E(Trt)-OH連接在2-氯三苯甲基氯樹脂上，用二氯甲烷作為溶劑進(jìn)行固相合成反應(yīng)，后抽干二氯甲烷；

S2、用DMF洗滌多次，用20％哌啶脫Fmoc，脫好后，再次用DMF洗滌多次，接著投放Fmoc-A(pbf)-OH、多肽縮合劑HBTU、HOBT、N-甲基嗎啡啉、DMF繼續(xù)固相合成反應(yīng)；

S3、后采用DMF洗滌多次，用20％哌啶脫Fmoc，脫好后，用DMF洗滌多次，后依次與Fmoc-R(pbf)-OH、Fmoc-Y(tBu)-OH、Fmoc-P(Boc)-OH進(jìn)行固相縮合，直到與最后一個P反應(yīng)結(jié)束，脫FMOC后，用95％的三氟乙酸切割液把制備的多肽從樹脂上分離切割2-3小時，并將所得粗品用高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，凍干即得到多肽PYRAE。

3.權(quán)利要求1所述的多肽PYRAE或權(quán)利要求2所述的制備方法制備的多肽PYRAE，如下任一種應(yīng)用：

(1)在制備BiP抑制劑藥物中的應(yīng)用；

(2)在制備抗癌藥物中的應(yīng)用；

(3)作為BiP抑制劑在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：所述多肽PYRAE與BiP結(jié)合并抑制BiP的ATPase活性；

優(yōu)選地，所述多肽PYRAE與BiP結(jié)合，其Kd＝57.7μM；

優(yōu)選地，所述多肽PYRAE與BiP結(jié)合并抑制BiP的ATPase活性，其IC₅₀＝92.33μM。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：所述多肽PYRAE引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白聚集和應(yīng)急，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤生長；

優(yōu)選地，所述多肽PYRAE在腫瘤細(xì)胞里的使用濃度為10～200μM。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：所述多肽PYRAE抑制乳腺癌細(xì)胞的生長；

優(yōu)選地，對乳腺癌小鼠，所述多肽PYRAE瘤旁皮下給藥濃度為10mg/kg。

7.一種藥物組合物，其特征在于：包括權(quán)利要求1所述的多肽PYRAE或權(quán)利要求2所述的制備方法制備的多肽PYRAE，以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。

8.熒光探針Mca修飾的多肽PYRAE，其結(jié)構(gòu)式如下：

9.權(quán)利要求8所述的熒光探針Mca修飾的多肽PYRAE的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、將Fmoc-E(Trt)-OH連接在2-氯三苯甲基氯樹脂上，用二氯甲烷作為溶劑進(jìn)行固相合成反應(yīng)，后抽干二氯甲烷；

S2、用DMF洗滌多次，用20％哌啶脫Fmoc，脫好后，再次用DMF洗滌多次，接著投放Fmoc-A(pbf)-OH、多肽縮合劑HBTU、HOBT、N-甲基嗎啡啉、DMF繼續(xù)固相合成反應(yīng)；

S3、后采用DMF洗滌多次，用20％哌啶脫Fmoc，脫好后，用DMF洗滌多次，后依次與Fmoc-R(pbf)-OH、Fmoc-Y(tBu)-OH、Fmoc-P(Boc)-OH進(jìn)行固相縮合；與Fmoc-Pro(Boc)-OH反應(yīng)完畢后，在避光條件下與酰基載體蛋白Acp、Mca進(jìn)行縮合，縮合結(jié)束后，脫FMOC后，用95％的三氟乙酸切割液把制備的多肽從樹脂上分離切割2-3小時，并將所得粗品用高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，凍干即得到熒光多肽Mca-PYRAE。

10.熒光探針Mca修飾的多肽PYRAE在腫瘤活細(xì)胞中示蹤劑中的應(yīng)用；

優(yōu)選地，所述熒光探針Mca修飾的多肽PYRAE在腫瘤活細(xì)胞中的使用濃度為10～100μM。