[發(fā)明專(zhuān)利]一種磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310259041.1
• 申請(qǐng)日: 2023-03-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116042607A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜真真;韓玲玲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 青島萬(wàn)物新生生物醫(yī)療科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京京標(biāo)立權(quán)專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 16143
• 代理人: 張宏闖

1.一種磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將試劑盒內(nèi)的試劑和磁珠取出，試劑包括裂解液、漂洗液和DNA洗脫液進(jìn)行；

S2、取出預(yù)封裝深孔板，顛倒混勻數(shù)次使磁珠重懸，輕甩孔板使不同試劑及磁珠均集中到孔板底部，也可使用孔板離心機(jī)；

S3、從采樣管中吸取700μL含核酸的糞便提取液至96深孔板的第2、8列的相應(yīng)孔中，做好標(biāo)識(shí)；

S4、將加入樣本的96深孔板放置在自動(dòng)化核酸提取儀底座正確位置；

S5、將八聯(lián)磁棒套插入自動(dòng)核酸提取儀磁棒套架卡槽內(nèi)；

S6、關(guān)艙門(mén)，進(jìn)行設(shè)置核酸提取程序，并選擇運(yùn)行；

S7、程序運(yùn)行完畢，取下96孔板，將位于第6、12列提取好的核酸轉(zhuǎn)移至干凈的離心管中，做好標(biāo)記，-20℃保存?zhèn)溆茫崛∵^(guò)程完成，此時(shí)可以棄去96孔板；

S8、OD值檢測(cè)：對(duì)提取的15份基因組DNA核酸進(jìn)行OD值檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示使用本方法對(duì)糞便基因組DNA進(jìn)行提取得到的DNA產(chǎn)物含量高且純度良好。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，其特征在于：在S6中，核酸提取程序的步驟為：

S6-1、在孔位1進(jìn)行開(kāi)啟一步吸磁模式，運(yùn)行取磁珠，體積為600μL，進(jìn)入孔板位置為90％，吸磁的位置在90％，吸磁的時(shí)間為10S；

S6-2、在孔位2進(jìn)行開(kāi)啟分布吸磁模式，運(yùn)行結(jié)合，體積為900μL，震動(dòng)的強(qiáng)度為低，震動(dòng)時(shí)間為600S，進(jìn)入孔板位置為90％，吸磁的位置在90％，吸磁的時(shí)間為30S；

S6-3、在孔位3進(jìn)行開(kāi)啟一步吸磁模式，運(yùn)行漂洗，體積為900μL，震動(dòng)的強(qiáng)度為中，震動(dòng)時(shí)間為180S，進(jìn)入孔板位置為90％，吸磁的位置在90％，吸磁的時(shí)間為60S；

S6-4、在孔位4進(jìn)行開(kāi)啟一步吸磁模式，運(yùn)行漂洗，體積為900μL，震動(dòng)的強(qiáng)度為中，震動(dòng)時(shí)間為180S，進(jìn)入孔板位置為90％，吸磁的位置在90％，吸磁的時(shí)間為60S；

S6-5、在孔位6進(jìn)行開(kāi)啟分步吸磁模式，運(yùn)行洗脫，體積為50μL，溫度為65℃，震動(dòng)的強(qiáng)度為中，震動(dòng)時(shí)間為120S，進(jìn)入孔板位置為80％，吸磁的位置在80％，吸磁的時(shí)間為60S；

S6-6、在孔位4運(yùn)行棄磁珠，體積為600μL，進(jìn)入孔板位置為90％，震動(dòng)的強(qiáng)度為低，震動(dòng)時(shí)間為20S；

S6-7、在孔位5運(yùn)行棄磁珠，體積為800μL，進(jìn)入孔板位置為90％，震動(dòng)的強(qiáng)度為中，震動(dòng)時(shí)間為30S；

S6-8、在孔位6進(jìn)行開(kāi)啟分步吸磁模式，運(yùn)行洗脫，體積為50μL，溫度為65℃，震動(dòng)的強(qiáng)度為中，震動(dòng)時(shí)間為70S，進(jìn)入孔板位置為90％，吸磁的位置在90％，吸磁的時(shí)間為30S；

S6-9、在孔位3運(yùn)行棄磁珠，體積為400μL，進(jìn)入孔板位置為90％，震動(dòng)的強(qiáng)度為中，震動(dòng)時(shí)間為10S。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，其特征在于：在所述S1中，裂解液的配方如下：Tris-HCl的濃度為100-200mmol/L(pH7.0-8.0)、EDTA濃度為5-20mmol/L、NaCl濃度為0.6-2.0mol/L、鹽酸胍的濃度為1.0-2.0mol/L、乙酸鈉的濃度為0.5-1.0mol/L、SDS體積分?jǐn)?shù)為5-8％、PVP體積分?jǐn)?shù)為0.5-1％、PEG200體積分?jǐn)?shù)為1-2％、聚丙烯酰胺體積分?jǐn)?shù)為0.1-0.2％和加入800mL去離子水?dāng)嚢枞芙猓^續(xù)加入去離子水定容至1L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，其特征在于：在所述S1中，磁珠漂洗液為體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇溶液，具體配制方法：量取700mL無(wú)水乙醇，并且加入300mL去離子水，混合均勻。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，其特征在于：在所述S1中，DNA洗脫液為T(mén)ris-HCl溶液，pH值為7.8，具體配制方法：稱(chēng)取3.2gTris-HCl加入去離子水定容至1L，濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，其特征在于：磁珠為粒徑100-400nm多分散磁性微球。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，其特征在于：在所述S2中，孔板離心機(jī)采用500rpm×1min進(jìn)行離心。