[發明專利]一種磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法

在審

• 申請號: 202310259041.1
• 申請日: 2023-03-17
• 公開（公告）號: CN116042607A
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 姜真真;韓玲玲
• 申請（專利權）人: 青島萬物新生生物醫療科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京京標立權專利代理事務所(普通合伙) 16143
• 代理人: 張宏闖

本發明提供了一種磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，包括以下步驟：S1、將試劑盒內的試劑和磁珠取出，試劑包括裂解液、漂洗液和DNA洗脫液進行；S2、取出預封裝深孔板，顛倒混勻數次使磁珠重懸，輕甩孔板使不同試劑及磁珠均集中到孔板底部，也可使用孔板離心機；S3、從采樣管中吸取700μL含核酸的糞便提取液至96深孔板的第2、8列的相應孔中，做好標識。本發明能夠實現自動化、高通量操作，配合96孔的核酸自動提取工序，在以往做一個樣品的提取時間內，可同時實現對96個樣品的處理，效率直接提高96倍，滿足了當前生物學高通量操作的要求，使得在大規模疫情爆發時能夠進行快速篩查原因。

技術領域

本發明涉及提取糞便基因組DNA技術領域，特別涉及一種磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法。

背景技術

酚氯仿提取基因組DNA是目前較傳統的方法，苯酚能夠將蛋白變性，同時可抑制DNA酶的降解作用；用平衡酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA聯結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與酚相似相溶；蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相；氯仿可克服酚的缺點，加速有機相與液相分層；最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的跡量酚(酚易溶于氯仿中)；離心分層后取出水層，用異丙醇沉淀DNA；然而苯酚能溶解10％-15％的水，從而溶解一部分DNA，造成部分DNA被損失；此外苯酚不能完全抑制DNase的活性，導致部分DNA被降解；并且這種方法非常耗時，且不便于自動化轉化，試劑可能有毒并危及健康。

硅膠膜離心吸附柱法也是常見的基因組DNA提取的方法之一，通過裂解液迅速裂解細胞，然后基因組DNA在高鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物，蛋白等雜質去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質膜上洗脫，但提取的DNA容易產生拖尾，表明純度不高，或有降解的產生，同樣不適合自動化及大規模提取，為此，提出一種磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法。

發明內容

有鑒于此，本發明希望提供一種磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，以解決或緩解現有技術中存在的技術問題，至少提供一種有益的選擇。

本發明實施例的技術方案是這樣實現的：一種磁珠法快速提取糞便基因組DNA的方法，包括以下步驟：

S1、將試劑盒內的試劑和磁珠取出，試劑包括裂解液、漂洗液和DNA洗脫液進行；

S2、取出預封裝深孔板，顛倒混勻數次使磁珠重懸，輕甩孔板使不同試劑及磁珠均集中到孔板底部，也可使用孔板離心機；

S3、從采樣管中吸取700μL含核酸的糞便提取液至96深孔板的第2、8列的相應孔中，做好標識；

S4、將加入樣本的96深孔板放置在自動化核酸提取儀底座正確位置；

S5、將八聯磁棒套插入自動核酸提取儀磁棒套架卡槽內；

S6、關艙門，進行設置核酸提取程序，并選擇運行；

S7、程序運行完畢，取下96孔板，將位于第6、12列提取好的核酸轉移至干凈的離心管中，做好標記，-20℃保存備用，提取過程完成，此時可以棄去96孔板；

S8、OD值檢測：對提取的15份基因組DNA核酸進行OD值檢測，檢測結果顯示使用本方法對糞便基因組DNA進行提取得到的DNA產物含量高且純度良好。

進一步優選的，在S6中，核酸提取程序的步驟為：

S6-1、在孔位1進行開啟一步吸磁模式，運行取磁珠，體積為600μL，進入孔板位置為90％，吸磁的位置在90％，吸磁的時間為10S；

S6-2、在孔位2進行開啟分布吸磁模式，運行結合，體積為900μL，震動的強度為低，震動時間為600S，進入孔板位置為90％，吸磁的位置在90％，吸磁的時間為30S；