[發明專利]血漿/尿液中兒茶酚胺及其代謝物的檢測試劑盒及其檢測方法和應用

在審

• 申請號: 202310254496.4
• 申請日: 2023-03-16
• 公開（公告）號: CN116482248A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 王美華;李義坤;劉鵬云;吳衛甲;劉華芬
• 申請（專利權）人: 杭州凱萊譜精準醫療檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/72;G01N30/86;G01N33/94;G01N1/28
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧;曹小燕

1.一種血漿/尿液中兒茶酚胺及其代謝物的檢測試劑盒，其特征在于，包括穩定劑、乙酸溶液、尿稀釋液和磁珠液；所述穩定劑用于保持血漿樣本中待測物的穩定性，包括抗壞血酸、谷胱甘肽、EDTA二鈉、揮發性酸以及非揮發性酸；乙酸溶液用于保持尿液樣本中待測物的穩定性；尿稀釋液為含有甲酸和乙酸銨的水溶液，用于使尿液樣本的pH保持一致；磁珠液用于處理血漿/尿液樣本，吸附提取待測物；所述兒茶酚胺及其代謝物包括腎上腺素、去甲腎上腺素、多巴胺、變腎上腺素、去甲基變腎上腺素、3-甲氧基酪氨。

2.如權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述穩定劑中的揮發性酸為甲酸或乙酸，非揮發性酸為磷酸或檸檬酸；當非揮發性酸為磷酸時，所述抗壞血酸、谷胱甘肽、EDTA二鈉的質量比為0.5～2：0.5～2：0.5～2，甲酸或乙酸的加量為0.5～2％，磷酸的加量為2～6％；當非揮發性酸為檸檬酸時，所述抗壞血酸、谷胱甘肽、EDTA二鈉、檸檬酸的質量比為0.5～2:0.5～2:0.5～2:20～50，甲酸或乙酸的加量為0.5～2％。

3.如權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述乙酸溶液為50％乙酸；所述磁珠液為磁珠溶于乙醇形成的懸濁液，所述磁珠為混合型弱陽離子交換磁珠。

4.如權利要求3所述的檢測試劑盒，其特征在于，還包括緩沖液、平衡液、淋洗液、洗脫液和液相色譜流動相；緩沖液為含有乙酸銨和氫氧化鈉的水溶液；平衡液為乙酸銨溶液；淋洗液為乙腈溶液；

洗脫液為含有乙酸銨、甲醇和甲酸的水溶液，液相流動相為甲酸水溶液和甲酸甲醇溶液。

5.一種檢測血漿/尿液中兒茶酚胺及其代謝物的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)樣本采集；血漿樣本需添加穩定劑，所述穩定劑包括抗壞血酸、谷胱甘肽、EDTA二鈉、揮發性酸以及非揮發性酸；尿液樣本需添加乙酸溶液；

(2)磁珠處理樣品，吸附提取待測物；

(3)液相色譜串聯質譜分析待測物含量；

所述兒茶酚胺及其代謝物包括E、NE、DA、MN、NMN、3-MT。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述揮發性酸為甲酸或乙酸，非揮發性酸為磷酸或檸檬酸；當非揮發性酸為磷酸時，所述抗壞血酸、谷胱甘肽、EDTA二鈉的質量比為0.5～2：0.5～2：0.5～2，甲酸或乙酸的加量為0.5～2％，磷酸的加量為2～6％；當非揮發性酸為檸檬酸時，所述抗壞血酸、谷胱甘肽、EDTA二鈉、檸檬酸的質量比為0.5～2:0.5～2:0.5～2:20～50，甲酸或乙酸的加量為0.5～2％。

7.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述穩定劑與血漿樣本的體積比為1：9～1:19。

8.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述的乙酸溶液為50％乙酸；乙酸溶液與尿液樣本的體積比為1：32～1：80。

9.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，在磁珠處理樣品前，血漿樣本中需添加內標液、緩沖液，尿液樣本需先添加尿稀釋液，再添加內標液和緩沖液；所述尿稀釋液為含有甲酸和乙酸銨的水溶液；所述內標液為含有腎上腺素-IS、去甲腎上腺素-IS、多巴胺-IS、變腎上腺素-IS、去甲基變腎上腺素-IS、3-甲氧基酪氨-IS的混合溶液；所述緩沖液為含有乙酸銨和氫氧化鈉的水溶液。