[發(fā)明專利]血漿/尿液中兒茶酚胺及其代謝物的檢測試劑盒及其檢測方法和應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310254496.4
• 申請日: 2023-03-16
• 公開（公告）號: CN116482248A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設計）人: 王美華;李義坤;劉鵬云;吳衛(wèi)甲;劉華芬
• 申請（專利權）人: 杭州凱萊譜精準醫(yī)療檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/72;G01N30/86;G01N33/94;G01N1/28
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧;曹小燕

本發(fā)明提供了一種血漿/尿液中兒茶酚胺及其代謝物的檢測試劑盒及其檢測方法和應用，通過在血漿中添加穩(wěn)定劑，在尿液中加酸，使血漿/尿液樣本中的待測物保持穩(wěn)定；采用磁珠吸附提取樣本中的待測物，再經高效液相色譜串聯(lián)質譜檢測兒茶酚胺及其代謝物的含量。該方法簡單高效，適用于不同來源的樣品，普適性好，樣品穩(wěn)定性高，可長期存放，操作過程自動化程度高，耗時短，靈敏度高，使用同一試劑盒、同一檢測方法同時對血漿和尿液的待測物進行提取和檢測，實現對兒茶酚胺及其代謝物檢測的標準化操作。

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)學檢驗技術領域，具體涉及兒茶酚胺及其代謝物的檢測，尤其是一種適用于血漿/尿液中兒茶酚胺及其代謝物的檢測試劑盒及其檢測方法和應用。

背景技術

兒茶酚胺(Catecholamines，CAs)是由腎上腺髓質和一些交感神經元嗜鉻細胞分泌的一類非常重要的神經遞質，參與、維持和調節(jié)神經系統(tǒng)，其主要包括腎上腺素(Epinephrine，E)、去甲腎上腺素(Norepinephrine，NE)、多巴胺(Dopamine，DA)。腎上腺素及去甲腎上腺素經酶的作用下生成變腎上腺素(Metanephrine，MN)、去甲基變腎上腺素(Normetanephrine，NMN)和3-甲氧基酪氨(3-Methoxytyramine，3-MT)，因此兒茶酚胺及其代謝物包括E、NE、DA、MN、NMN、3-MT。兒茶酚胺及其代謝物的濃度測定是嗜鉻細胞瘤和副神經節(jié)瘤(Pheochromocytoma?and?paraganglioma，PPGL)定性診斷的主要依據。

血漿和尿液中CAs及其代謝物水平與人體多種生理、病理現象有密切關系，對人體的心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、神經精神系統(tǒng)和內分泌代謝系統(tǒng)等的生理活動起著廣泛的調節(jié)作用。兒茶酚胺類物質，作為維持人體正常運轉的重要神經遞質，與神經內分泌疾病有重要的相關性。臨床研究發(fā)現檢測生物樣本中的CAs水平不僅對于嗜鉻細胞瘤、副神經節(jié)瘤、神經母細胞瘤、高血壓、心肌梗塞、腎上腺髓質增生等疾病的診斷和治療具有重要的臨床意義，并且有助于甲狀腺功能異常、充血性心力衰竭、糖尿病、腎臟功能不全等疾病的診斷。同時，對于神經電生理等基礎醫(yī)學研究也具有重要的意義。

目前國內外有關血漿/尿液中兒茶酚胺的測定方法報道很多，常見的方法有：生物分析法、比色法，靈敏度較低；熒光法，易受其他內源性化合物干擾；放酶法，操作繁瑣；化學發(fā)光法，檢測靈敏度不能滿足臨床檢測需要；液相色譜與電化學連用，雖然靈敏度和選擇性高，但耗時長，也易受到多種物質干擾。液相色譜串聯(lián)質譜法因其靈敏度高、特異性強、檢測通量高被作為測定兒茶酚胺及其代謝物的首選。

由于兒茶酚胺類物質的化學結構中帶有一個雙羥基苯環(huán)和一個帶氨基的側鏈，極性較大，易溶于水，其中的鄰苯二酚結構在酸性條件下比較穩(wěn)定，中性或堿性條件下易被氧化成醌。

尿液中兒茶酚胺的含量常為ng級，血漿中兒茶酚胺含量極微，低至幾十pg/mL，其特殊的化學結構導致易被氧化，穩(wěn)定性較差。如何實現尿液、血漿樣本的統(tǒng)一標準化檢測也依然存在困難。

CN109959739A提供了一種檢測血漿中兒茶酚胺含量的液質分析方法，其主要是通過SPE法對去甲腎上腺素、腎上腺素和多巴胺進行提取檢測，其中檢測的血漿置于-80℃保存。此方案采用的SPE樣本前處理方案操作復雜，操作所需時間及人力成本較高，不易實現前處理及檢測過程的自動化；樣本需要保存在-80℃和運輸，對存放條件要求苛刻，運輸成本高；僅對兒茶酚胺進行測試，兒茶酚胺代謝物的檢測方法并未提供。CN114354822A提供了一種基于磁性吸附劑快速提取兒茶酚胺的方法，其主要是通過磁珠法自動化定量檢測血漿、尿液中六種兒茶酚胺及其代謝物，雖然前處理簡單，但檢測靈敏度較低，無法起到輔助診斷的效果，且仍未能解決兒茶酚胺及其代謝物穩(wěn)定性差的問題，樣品必須即采即測，難以儲存和運輸。

CN111208220A提供了一種血漿型凍干粉兒茶酚胺類物質的質控品的穩(wěn)定劑，通過在質控品中添加穩(wěn)定劑、賦形劑、抗氧化劑、防腐劑等物質來提高穩(wěn)定性，但是其仍然需要充入氮氣來保存，而且凍干和充氮本來就是提高穩(wěn)定性的手段，可見其穩(wěn)定性依然不理想。