[發明專利]一種蜂膠提取物中總黃酮含量的拉曼測定方法

在審

• 申請號: 202310251710.0
• 申請日: 2023-03-16
• 公開（公告）號: CN116297398A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 邵興軍;張迪;毛日文;仲延龍;朱惠芬
• 申請（專利權）人: 江蘇江大源生態生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N1/28;G01N1/34
• 代理公司: 上海海頌知識產權代理事務所(普通合伙) 31258
• 代理人: 季萍

1.一種蜂膠提取物中總黃酮含量的拉曼測定方法，其特征在于，包括：制備了針對蜂膠中黃酮檢測的金納米球、金屬-酚醛網絡、環氧樹脂和聚甲基丙烯酸甲酯-微針復合檢測材料，并依次建立了一種基于表面增強拉曼技術的蜂膠黃酮快速檢測方法。

2.根據權利要求1所述的蜂膠提取物中總黃酮含量的拉曼測定方法，其特征在于，具體步驟如下：

一、繪制蜂膠總黃酮標準曲線；

首先制備不同濃度的蘆丁標準溶液、金納米球、金屬-酚醛網絡、環氧樹脂和聚甲基丙烯酸甲酯-微針復合檢測材料；然后分別取不同濃度的蘆丁標準溶液，體積均相同，記為V1；將金納米球、金屬-酚醛網絡、環氧樹脂和聚甲基丙烯酸甲酯-微針復合檢測材料分別浸入V1體積的不同濃度標準溶液中，在室溫下進行孵化，取出后得到不同濃度標準溶液下的微針結合物；

待干燥后利用拉曼光譜儀掃描微針結合物獲得拉曼光譜圖；以特征拉曼峰作為定量基準峰，測定定量基準峰位移處的拉曼峰強度值I，以蘆丁標準溶液濃度與其相對應的拉曼峰強度值I繪制標準曲線。

3.根據權利要求2所述的蜂膠提取物中總黃酮含量的拉曼測定方法，其特征在于，步驟一中，所述蘆丁標準溶液濃度范圍為0～5mg/mL；所述蘆丁標準溶液的濃度為0.1～5mg/mL；所述金納米球、金屬-酚醛網絡、環氧樹脂和聚甲基丙烯酸甲酯-微針復合檢測材料用量與V1的比例為1片：10～20μL。

4.根據權利要求2所述的蜂膠提取物中總黃酮含量的拉曼測定方法，其特征在于，步驟一中，所述在室溫下進行孵化的時間為10～20s；所述拉曼特征峰為1580～1630cm^-1。

5.根據權利要求2所述的蜂膠提取物中總黃酮含量的拉曼測定方法，其特征在于，步驟一中，所述金納米球、金屬-酚醛網絡、環氧樹脂和聚甲基丙烯酸甲酯-微針復合檢測材料的具體制備方法如下：

a、制備金屬-酚醛網絡溶液：將聚乙烯吡咯烷酮和六水合氯化鐵加入到含有去離子水的燒瓶中，然后將鞣酸加入混合物中并在室溫下攪拌20min；通過離心收集下層沉淀，離心條件為3000rpm/min且10min；并重懸于去離子水中，得到金屬-酚醛網絡溶液。

6.根據權利要求5所述的蜂膠提取物中總黃酮含量的拉曼測定方法，其特征在于，步驟a中，所述聚乙烯吡咯烷酮的濃度為1～4mg/mL，六水合氯化鐵的濃度為0.1～0.3mg/mL；鞣酸的濃度為0.1～1mg/mL；去離子水的用量為10～20mL；所述在室溫下攪拌的時間為10～20min；所述離心的條件為2000～5000rpm/min，5～10min；

b、制備環氧樹脂溶液：將環氧樹脂溶解在氯仿中，得到混合物A；再取環氧固化劑溶解在氯仿中，得到混合物B；將混合物A、B分別進行超聲，接著將兩者混合、密封并繼續超聲，得到環氧樹脂溶液。

7.根據權利要求6所述的蜂膠提取物中總黃酮含量的拉曼測定方法，其特征在于，步驟b中，所述環氧樹脂與環氧固化劑的用量比為1g：(1～5)g；所述混合物A、B中氯仿的用量比為25mL：(20～50)mL；所述超聲的條件為室溫下超聲10～30min；

c、合成環氧樹脂、聚甲基丙烯酸甲酯-微針：用無水乙醇和去離子水洗滌聚甲基丙烯酸甲酯-微針，然后將聚甲基丙烯酸甲酯-微針浸入環氧樹脂溶液中，取出后置于烘箱中干燥，得到環氧樹脂、聚甲基丙烯酸甲酯-微針。