[發明專利]加帽聚核苷酸、加帽mRNA及組合物、藥物蛋白及制備方法和應用、藥物制劑

在審

• 申請號: 202310239920.8
• 申請日: 2023-03-13
• 公開（公告）號: CN116239642A
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 姚峰;楊陽;張定遠;李幼辰;王晨;陳江波;趙佳琰;陳哲賢;鄒志輝
• 申請（專利權）人: 上海兆維科技發展有限公司;上海兆維生物工程有限公司
• 主分類號: C07H21/02
• 分類號: C07H21/02;C12N15/10;C07K14/435;C07H1/00;A61K31/712;A61P35/00
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 呂露

本申請實施例提供一種加帽聚核苷酸、加帽mRNA及組合物、藥物蛋白及制備方法和應用、藥物制劑，涉及基因工程技術領域。本申請實施例中的加帽聚核苷酸，至少一個五碳糖和相鄰的磷酸之間是通過碳碳雙鍵連接的，這種加帽聚核苷酸在制備加帽mRNA時，能使得制得的加帽mRNA更加穩定，翻譯活性更好，分解率更低，同時也有利于提升加帽率。

技術領域

本申請涉及基因工程技術領域，具體而言，涉及一種加帽聚核苷酸、加帽mRNA及組合物、藥物蛋白及制備方法和應用、藥物制劑。

背景技術

信使RNA(Messenger?RNA，mRNA)是基因組中攜帶蛋白質編碼信息的單鏈多核苷酸鏈，可作為藥物、疫苗等使用；目前可以使用體外轉錄(In?Vi?tro?Transcription，IVT)方法在體外合成mRNA。在合成mRNA后，需要對mRNA的5'進行修飾，這種修飾結構一般被稱為帽狀結構。帽狀結構可以防止mRNA在5'端發生降解、同時也能起到幫助mRNA穿過核膜的選擇性孔道而進入細胞質、增強翻譯、幫助完成全部剪切過程等作用。

現有的帽狀結構一般是以N7甲基鳥苷(M7G)為基礎，通過5',5'-三磷酸橋(m7GpppN)與RNA相連，這種帽狀結構的結構被稱為Cap?0，但是Cap0結構的加帽率不高，而且加帽后的mRNA穩定性也較差，在生物體內的降解率也較高；使用含有這種帽結構的mRNA進行蛋白質的翻譯時，翻譯活性較低。

發明內容

本申請實施例的目的在于提供一種加帽聚核苷酸、加帽mRNA及組合物、藥物蛋白及制備方法和應用、藥物制劑，能增強加帽mRNA的穩定性和加帽率，降低加帽mRNA在生物體內的降解率，提高加帽mRNA的翻譯活性。

第一方面，本申請實施例提供了一種加帽聚核苷酸，其為以下結構通式的化合物，或為以下結構通式的化合物的鹽形式：

E₁至E₅中的每一個均為碳，Z₁至Z₅中的每一個獨立地為碳或氧，且E₁和Z₁之間、E₂和Z₂之間、E₃和Z₃之間、E₄和Z₄之間、E₅和Z₅之間至少一處為碳碳雙鍵；B₁至B₄中的每一個獨立地為核苷堿基；m₁、m₂分別為0或1；n₁為1，且n₂、n₃中的每一個獨立地為0～20中的任一整數；G₁、G₂分別為氫或甲基；R₁至R₆中的每一個獨立地為氫、羥基、烷基、烷氧基、鹵素中的任一種；X₁至X₆中的每一個獨立地為氧、硫、＝NH、＝NCH₃中的任一種；Y₁至Y₆中的每一個獨立地為羥基、巰基、硒、芳基、烷基、烷氧基、芳氧基、-BH₃、-NH₂、-NHCH₃、-NH(C(＝O)CH₃)中的任一種；Q₁、Q₂分別為氧、硫、亞甲基中的任一種。

在上述技術方案中，發明人發現，由于上述結構通式的加帽聚核苷酸在E₁和Z₁之間、E₂和Z₂之間，直至E₅和Z₅之間至少一處存在碳碳雙鍵，當用上述加帽聚核苷酸給mRNA片段的5'加帽時，就能明顯地改善mRNA片段的穩定性和加帽率，降低加帽后的mRNA片段在生物體中的降解率，同時后續使用含有該加帽聚核苷酸的mRNA片段翻譯蛋白質時，翻譯活性也較高。