[發(fā)明專利]一種檢測農(nóng)藥的比色傳感器、其制備方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310239563.5
• 申請(qǐng)日: 2023-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN116297429A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 侯秀丹;劉倩文;劉永超;楊慶利;葛家成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78;G01N33/53;G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 山東三邦知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37308
• 代理人: 高洋

本發(fā)明公開了一種檢測農(nóng)藥的比色傳感器、其制備方法及應(yīng)用，屬于有害物質(zhì)檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的比色傳感器，由捕獲探針和信號(hào)探針組成；其中，捕獲探針選自Au?SSM膜材料修飾的帶有巰基的核酸適配體，即SH?aptamer?Au?SSM；信號(hào)探針選自AuPt@IL@Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;納米材料修飾的帶有巰基的cDNA，即SH?cDNA?AuPt@IL@Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;。本發(fā)明的比色傳感器能夠特異性識(shí)別啶蟲脒，且在檢測方法上操作簡便，無需對(duì)待測樣本進(jìn)行復(fù)雜的前處理；檢測成本低，檢測快速，對(duì)檢測儀器的要求低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于有害物質(zhì)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測農(nóng)藥的比色傳感器、其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

啶蟲脒是一種新型吡啶類殺蟲劑，具有胃毒、觸殺和較強(qiáng)的滲透作用，具有速效的殺蟲力，殘效期長，是土壤和枝葉的系統(tǒng)殺蟲劑，廣泛用于水稻，尤其是蔬菜、果樹、茶葉等部分鱗翅目害蟲的防治。生物農(nóng)藥殘留危害人體健康。目前，啶蟲脒農(nóng)藥殘留的檢測方法主要是傳統(tǒng)的儀器檢測分析技術(shù)，其檢測方法主要集中在色譜技術(shù)上，包括氣相色譜法、氣相/液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和高效液相色譜法等。它們有較高的靈敏度和穩(wěn)定性，但是，常規(guī)的色譜-質(zhì)譜檢測等分析農(nóng)藥殘留的技術(shù)成本較高、所需檢測時(shí)間長，大多存在設(shè)備昂貴、溶劑消耗量大，不能滿足現(xiàn)場快速檢測的缺陷。因此，開發(fā)一種操作簡便，檢測快速，靈敏度高且對(duì)檢測儀器要求低的新型檢測技術(shù)尤為關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種比色傳感器，由捕獲探針和信號(hào)探針組成；其中，捕獲探針選自Au-SSM膜材料修飾的帶有巰基的核酸適配體，即SH-aptamer-Au-SSM；信號(hào)探針選自納米材料修飾的帶有巰基的cDNA，即SH-cDNA-納米材料；在本發(fā)明中，納米材料可選自AuPt@IL@Fe₃O₄，即所述信號(hào)探針可選自SH-cDNA-AuPt@IL@Fe₃O₄。

上述SH-aptamer選自如下序列：

5'-SH-AAAAAAAAAAAACTGACACCATATTATGAAGA-3'。

上述SH-cDNA選自如下序列：

5'-SH-AAAAAAAAAAAATCTTCATAATATGG-3'。

上述SH-aptamer-Au-SSM可選自如下方法制備：

首先，采用TCEP激活SH-aptamer，獲得SH-aptamer激活體系；然后，將Au-SSM膜材料與SH-aptamer激活體系混合，加水，在37℃下孵育；待孵育結(jié)束后，洗滌除去未結(jié)合的單鏈SH-aptamer，加入1％牛血清蛋白封閉未結(jié)合位點(diǎn)，形成SH-aptamer-Au-SSM。

上述Au-SSM膜材料與SH-aptamer激活體系的用量，以SH-aptamer能夠與Au-SSM膜材料充分結(jié)合為佳，其可以是，每1～3片直徑約5mm的Au-SSM膜材料對(duì)應(yīng)采用10μLSH-aptamer激活體系；也可以是其它用量比例。上述水的用量，以能夠?yàn)榉跤峁┳銐蛞簯B(tài)環(huán)境為佳，其可以是，每一片直徑約5mm的Au-SSM膜材料對(duì)應(yīng)采用80～100μL水，也可以是其它用量，只要在合理范圍內(nèi)，均不影響孵育過程。

上述Au-SSM膜材料可選自如下方法制備：

將金屬網(wǎng)剪成小圓片，即獲得SSM膜；然后將SSM膜置于稀鹽酸中腐蝕，至產(chǎn)生小氣泡后取出，清洗；將SSM膜加至3-氨丙基三乙氧基硅烷中，靜置，清洗，烘干；然后將SSM膜加至HAuCl₄中，先靜置，再震蕩，然后加冰硼氫化鈉震蕩，再靜置，最后將SSM膜取出，烘干，得到Au-SSM膜材料。

上述SSM膜的直徑可選自1～10mm；優(yōu)選為5mm。