[發(fā)明專利]一種基于超高效液相色譜法檢測微藻中炔雌醇的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202310239413.4
• 申請日: 2023-03-13
• 公開（公告）號: CN116297949A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王振;吳小敏;王裕文;劉曉娟
• 申請（專利權(quán)）人: 汕頭大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 廖奇麗

1.一種檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，采用超高效液相色譜法梯度洗脫程序進行檢測；所述梯度洗脫程序為：0-2.5min時使用體積濃度為10％的甲醇，2.5-5min時使甲醇濃度上升到40％，5-7.5min持續(xù)使用40％甲醇，7.5-8min使甲醇濃度上升到90％，8-17min持續(xù)使用90％甲醇，17-17.5min使甲醇濃度下降到10％，運行至20min，結(jié)束。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，在所述超高效液相色譜法的色譜條件中：流動相A包括超純水，流動相B包括甲醇。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，所述流動相A和流動相B的體積比為(0.1-9)：1。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，所述流動相A和流動相B的流速為0.05-0.3mL/min，進樣量為1-10uL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，在所述超高效液相色譜法的色譜條件中，波長為220-280nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，在所述超高效液相色譜法的色譜條件中，色譜柱為C18?5μm?4.6x?250mm，柱溫為30-40℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，所述微藻包括淡水微藻。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任意一項所述的檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

(1)在炔雌醇暴露后的微藻液中加入甲醇，進行渦旋，萃取出微藻中的炔雌醇，得萃取液；

(2)將步驟(1)制得的萃取液進行過濾、冷凍后，得炔雌醇樣品溶液；

(3)采用超高效液相色譜法檢測步驟(2)制得的炔雌醇樣品溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，所述炔雌醇暴露后的微藻液的制備過程為：在BG11培養(yǎng)基中加入炔雌醇，使BG11培養(yǎng)基中決雌醇的暴露濃度為10-20mg/L；進行滅菌后，冷卻至室溫，在無菌操作臺完成無菌轉(zhuǎn)接微藻，使微藻液的濃度為3×10⁷-8×10⁷個微藻細(xì)胞/mL，制得。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測微藻中炔雌醇的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述微藻液與所述甲醇的體積比為(0.5-1)：1。