[發(fā)明專(zhuān)利]基于酶輔助固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器、制備方法和應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202310234906.9 | 申請(qǐng)日： | 2023-03-13 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN116559423A | 公開(kāi)（公告）日： | 2023-08-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳一桐;孔德昭;顧一丹;陶春旭;唐盛;沈薇;劉暢;史巧巧 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 江蘇科技大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | G01N33/533 | 分類(lèi)號(hào)： | G01N33/533;G01N21/64;G01N33/53;G01N33/551 |
| 代理公司： | 南京經(jīng)緯專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 32200 | 代理人： | 余俊杰 |
| 地址： | 212100 江*** | 國(guó)省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 基于 輔助 固相微 萃取 熒光 響應(yīng) 傳感器 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.基于酶輔助固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器，其特征在于，所述傳感器包括表面依次經(jīng)羥基化和氨基化的石英棒，羧基修飾的2GDNA序列；其中，2GDNA序列偶聯(lián)在石英棒表面，2GDNA序列為SEQ?ID?NO.1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酶輔助固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器，其特征在于，所述傳感器在鏈霉素存在的環(huán)境中，鏈霉素被核酸適配體SEQ?ID?NO.2捕獲，過(guò)量的適配體與傳感器表面的2GDNA序列互補(bǔ)結(jié)合，利用切刻內(nèi)切酶Nt.BstNBI輔助剪切互補(bǔ)雙鏈釋放G四鏈體二聚體序列，G四鏈體二聚體序列與ThT結(jié)合，實(shí)現(xiàn)熒光增強(qiáng)響應(yīng)。
3.權(quán)利要求1或2所述的基于酶輔助固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
S1、羥基化石英棒
將石英棒在去離子水中超聲清洗，無(wú)塵紙擦拭干凈后置于食人魚(yú)溶液中，室溫400～600rpm震蕩處理12～16h，采用去離子水沖洗并用氮?dú)獯蹈桑?/p>
S2、氨基化石英棒
將S1羥基化后的石英棒置于氨基化溶液中，30℃恒溫?fù)u床上400～600rpm振蕩過(guò)夜處理，依次采用乙醇、水沖洗，氮?dú)獯蹈桑?/p>
S3、固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器
采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽活化5’端修飾羧基的2GDNA，常溫活化30～45min，向其中加入N-羥基琥珀酰亞胺，充分振蕩5～10min，4℃下恒溫?fù)u床上孵育過(guò)夜。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于酶輔助固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器的制備方法，其特征在于，S2中氨基化溶液由體積比為3-氨丙基三乙氧基硅烷:水:乙醇＝1:0.8～1:30～48組成，處理溫度為30℃，反應(yīng)時(shí)間為12～16h。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于酶輔助固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器的制備方法，其特征在于，S3中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量濃度為10～20mg/mL，N-羥基琥珀酰亞胺的質(zhì)量濃度為10～20mg/mL，二者的體積比為1:0.8～1。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于酶輔助固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器的制備方法，其特征在于，S3中2GDNA的使用濃度為750～1000nM，與1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的體積比為1:1。
7.權(quán)利要求1或2所述的基于酶輔助固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器在檢測(cè)食品中鏈霉素的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，檢測(cè)方法為：在待測(cè)樣品中加入50～100μL的鏈霉素核酸適配體溶液，室溫下在內(nèi)襯管中震蕩孵育90～120min，插入固相微萃取熒光響應(yīng)傳感器，40℃下震蕩孵育120～150min后取出并轉(zhuǎn)移至含有Nt.BstNBI酶溶液的內(nèi)襯管中55℃震蕩孵育60～90min，然后加入10～20μL?THT溶液繼續(xù)震蕩孵育，測(cè)定孵育后反應(yīng)液的熒光強(qiáng)度，根據(jù)熒光強(qiáng)度及熒光強(qiáng)度與鏈霉素濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算待測(cè)樣品中的鏈霉素濃度。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，鏈霉素核酸適配體與傳感器表面的核酸序列互補(bǔ)結(jié)合，形成特異性剪切位點(diǎn)SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4；與Nt.BstNBI酶溶液震蕩孵育后剪切出G四鏈體二聚體，序列為SEQ?ID?NO.5。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述傳感器檢測(cè)鏈霉素的檢出限為0.01084nM。
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