[發(fā)明專利]一種靶向促炎型巨噬細胞的工程化外泌體及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310206271.1
• 申請日: 2023-03-03
• 公開（公告）號: CN116515905A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳林;曠梁;李松;陳涵綱;倪振洪;謝楊麗;杜曉蘭;朱瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍陸軍特色醫(yī)學(xué)中心
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;A61K47/46;A61K9/50;A61K47/62;A61K31/7105;A61K49/00;A61P19/02;C12N15/65;C12N15/62;C12N5/10
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 廖曦

本發(fā)明涉及一種靶向促炎型巨噬細胞的工程化外泌體及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。所述外泌體的膜外表面負載靶向肽，膜內(nèi)表面負載標(biāo)記蛋白。經(jīng)過工程化改造的外泌體可以對促炎型巨噬細胞進行活體示蹤和顯像等診斷性操作。同時由于其可以高效特異地靶向促炎型巨噬細胞，因此也可以為促炎型巨噬細胞遞送治療性介質(zhì)，從而為如骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等炎性疾病提供一種高效、特異且安全的治療策略。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種靶向促炎型巨噬細胞的工程化外泌體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

促炎型巨噬細胞通常是由TNF-γ、Toll樣受體等誘導(dǎo)，產(chǎn)生一系列如TNF-α、IL-6和iNOS促炎因子，是骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及骨、軟骨損傷等多種炎性疾病的靶細胞。促炎型巨噬細胞與上述疾病的發(fā)生發(fā)展及疾病活躍程度密切相關(guān)，因此通過對促炎型巨噬細胞組織分布情況進行活體觀測可作為相關(guān)疾病研究的重要依據(jù)。此外，在炎性疾病中，HIF-1α是多種病理生理過程的調(diào)控信號，在多種生命活動中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。例如HIF-1α在關(guān)節(jié)軟骨細胞中，具有促進軟骨細胞存活、增殖，維持關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)代謝平衡等功能；然而在巨噬細胞中，其具有促進巨噬細胞炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致滑膜炎癥反應(yīng)加重、關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)活動障礙，甚至加劇骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等炎性疾病中骨與關(guān)節(jié)軟骨的破壞。研究表明，調(diào)控HIF-1α水平可以用于炎性疾病治療，然而廣泛干預(yù)該信號會產(chǎn)生嚴重的副作用，從而限制其臨床應(yīng)用。靶向干預(yù)是常見的調(diào)控HIF-1α水平的手段之一，靶向干預(yù)促炎型巨噬細胞HIF-1α可避免無差別干預(yù)HIF-1α可能引起的潛在不利影響，從而更好地發(fā)揮疾病治療作用。目前采用的靶向材料為納米粒子或化學(xué)合成材料，相較于納米粒子、化學(xué)合成材料等靶向(或遞送)材料，工程化外泌體具有高效、非預(yù)知毒副作用小以及適用性廣等優(yōu)勢，但是目前尚無有關(guān)利用工程化外泌體實現(xiàn)促炎型巨噬細胞靶向操作及治療性介質(zhì)遞送的報道。

因此，為了對促炎型巨噬細胞進行活體示蹤和顯像，從而便于相關(guān)疾病的研究，同時彌補尚無工程化外泌體靶向作用促炎巨噬細胞，從而將干預(yù)促炎型巨噬細胞HIF-1α產(chǎn)生的副作用降到最低這一空白，有必要研發(fā)一種靶向促炎型巨噬細胞的工程化外泌體。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種靶向促炎型巨噬細胞的工程化外泌體；本發(fā)明的目的之二在于提供一種靶向促炎型巨噬細胞的工程化外泌體的制備方法；本發(fā)明的目的之三在于提供一種靶向促炎型巨噬細胞的工程化外泌體在對促炎型巨噬細胞活體示蹤和顯像以及制備炎癥疾病治療藥物方面的應(yīng)用。

為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

1.一種靶向促炎型巨噬細胞的工程化外泌體，所述外泌體的膜外表面負載靶向肽，膜內(nèi)表面負載標(biāo)記蛋白。

優(yōu)選的，所述外泌體來源于工具細胞、胚胎干細胞、圍產(chǎn)期干細胞、成體干細胞或誘導(dǎo)性多能干細胞中的任意一種。

優(yōu)選的，所述工具細胞選自HEK?293、Hela、NCI-60、CHOs、C3H10T1/2、SW1353、MC3T3-E1、RAW264.7或C2C12中的任意一種；所述圍產(chǎn)期干細胞選自臍帶血、臍帶、胎盤、間充質(zhì)干細胞或亞全能干細胞中的任意一種；所述成體干細胞選自骨髓、脂肪、神經(jīng)或皮膚中的任意一種。

優(yōu)選的，所述靶向肽的氨基酸序列為FQHPSFI、SPLSQSA、LPSSGAA、TGSPELH、QMPEMKA、RQSHLKV、SGYPRHY、KYNTHHA、RGD或TKPR。

優(yōu)選的，所述標(biāo)記蛋白為綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、黃色熒光蛋白或藍色熒光蛋白中的任意一種。

2.所述靶向促炎型巨噬細胞的工程化外泌體的制備方法，所述制備方法如下：