[發(fā)明專利]一種靶向促炎型巨噬細(xì)胞的工程化外泌體及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310206271.1
• 申請(qǐng)日: 2023-03-03
• 公開（公告）號(hào): CN116515905A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳林;曠梁;李松;陳涵綱;倪振洪;謝楊麗;杜曉蘭;朱瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍陸軍特色醫(yī)學(xué)中心
• 主分類號(hào): C12N15/867
• 分類號(hào): C12N15/867;A61K47/46;A61K9/50;A61K47/62;A61K31/7105;A61K49/00;A61P19/02;C12N15/65;C12N15/62;C12N5/10
• 代理公司: 北京同恒源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 廖曦

1.一種靶向促炎型巨噬細(xì)胞的工程化外泌體，其特征在于：所述外泌體的膜外表面負(fù)載靶向肽，膜內(nèi)表面負(fù)載標(biāo)記蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靶向促炎型巨噬細(xì)胞的工程化外泌體，其特征在于：所述外泌體來源于工具細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、圍產(chǎn)期干細(xì)胞、成體干細(xì)胞或誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞中的任意一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種靶向促炎型巨噬細(xì)胞的工程化外泌體，其特征在于：所述工具細(xì)胞選自HEK?293、Hela、NCI-60、CHOs、C3H10T1/2、SW1353、MC3T3-E1、RAW264.7或C2C12中的任意一種；所述圍產(chǎn)期干細(xì)胞選自臍帶血、臍帶、胎盤、間充質(zhì)干細(xì)胞或亞全能干細(xì)胞中的任意一種；所述成體干細(xì)胞選自骨髓、脂肪、神經(jīng)或皮膚中的任意一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靶向促炎型巨噬細(xì)胞的工程化外泌體，其特征在于：所述靶向肽的氨基酸序列為FQHPSFI、SPLSQSA、LPSSGAA、TGSPELH、QMPEMKA、RQSHLKV、SGYPRHY、KYNTHHA、RGD或TKPR。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靶向促炎型巨噬細(xì)胞的工程化外泌體，其特征在于：所述標(biāo)記蛋白為綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、黃色熒光蛋白或藍(lán)色熒光蛋白中的任意一種。

6.權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的一種靶向促炎型巨噬細(xì)胞的工程化外泌體的制備方法，其特征在于：所述制備方法如下：

將編碼重組蛋白的DNA序列插入PLVX-puro慢病毒載體中，獲得含有編碼重組蛋白DNA序列的慢病毒，所述重組蛋白含有所述靶向肽和所述標(biāo)記蛋白；然后感染分泌外泌體的細(xì)胞得到可分泌工程化外泌體的工程化細(xì)胞，收集所述工程化細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)后的工程化細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行過濾、離心，即可獲得可靶向促炎型巨噬細(xì)胞的工程化外泌體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于：所述重組蛋白包括信號(hào)肽、靶向肽、LAMP2B、標(biāo)記蛋白和連接肽，信號(hào)肽、3個(gè)靶向肽、LAMP2B之間通過連接肽依次連接，LAMP2B的末端連接標(biāo)記蛋白，所述信號(hào)肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，LAMP2B的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；標(biāo)記蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：3所示；連接肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。

8.權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的靶向促炎型巨噬細(xì)胞的工程化外泌體在對(duì)促炎型巨噬細(xì)胞活體示蹤、顯像以及制備炎癥疾病治療藥物中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述炎癥疾病為關(guān)節(jié)炎。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述炎癥疾病治療藥物中包含裝載HIF-1α-siRNA的工程化外泌體，所述HIF-1α-siRNA的序列為:AAACAGAGACGAAGGACAATT。