[發明專利]哺乳動物細胞表面展示質粒、細胞系及抗體檢測方法、高產抗體細胞株的檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202310204624.4
• 申請日: 2023-03-06
• 公開（公告）號: CN116286977A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 鮑凌志;潘家潔;楊愛珍;馬潔;趙國平;陳少鵬
• 申請（專利權）人: 皖南醫學院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;G01N33/68;G01N33/569;G01N15/14;C12N15/10;G01N21/64;C07K16/24;C12R1/91
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 任晨晨

1.哺乳動物細胞表面展示質粒，其特征在于，所述哺乳動物細胞表面展示質粒包括：蛋白分泌信號肽、抗體Fc片段結合肽Z或ZZ和跨膜結構域。

2.根據權利要求1所述的哺乳動物細胞表面展示質粒，其特征在于，所述蛋白分泌信號肽為信號肽BM40，信號肽Azurocidin?preproprotein，信號肽Serum?albuminpreproprotein或信號肽human?Igκchain。

3.根據權利要求1或2所述的哺乳動物細胞表面展示質粒，其特征在于，所述哺乳動物細胞表面展示質粒為：以pUHD?10-3為載體，合成包含有信號肽、Fc結合肽(Z或ZZ)以及跨膜結構域的基因序列，用EcoRI/XbaI酶切插入，獲得pUHD-Z-dis或pUHD-ZZ-dis質粒。

4.根據權利要求1所述的哺乳動物細胞表面展示質粒，其特征在于，所述哺乳動物細胞表面展示質粒為：以pcDNA-I-W-2a-GFP為載體，用XbaI/SalI酶切插入合成的包含信號肽、標簽、Fc結合肽以及跨膜結構域的基因序列，獲得pSPsaST1ZB7或pSPsaST1ZZB7質粒。

5.哺乳動物細胞表面展示的細胞系，其特征在于，將權利要求1-4任一項所述哺乳動物細胞表面展示質粒轉染進哺乳動物細胞獲得。

6.根據權利要求5所述的哺乳動物細胞表面展示的細胞系，其特征在于，將哺乳動物細胞表面展示質粒轉染進CHO細胞，利用hIgG-FITC進行熒光標記，運用流式細胞分選，獲得穩定高效展示Fc結合肽ZZ的細胞CHO-ZZ。

7.根據權利要求5所述的哺乳動物細胞表面展示的細胞系，其特征在于，所述哺乳動物包括人、兔、驢、羊或鼠。

8.抗體的檢測方法，其特征在于，用已知濃度的標準抗體對高效展示ZZ的穩定的哺乳動物細胞進行檢測，建立抗體濃度-熒光的標準曲線，并擬合標準方程，根據標準方程，對未知濃度抗體進行定量檢測。

9.高產抗體細胞株的檢測方法，其特征在于，具體為：收獲抗體分泌細胞克隆的培養基，直接標記高效展示ZZ的穩定的哺乳動物細胞，再運用流式細胞術對抗體標記上的陽性細胞進行檢測，以陽性細胞的占比為標準，篩選高效分泌高活性抗體的細胞克隆。

10.權利要求9所述高產抗體細胞株檢測方法的應用，其特征在于，用于制備抗體藥物的應用。