[發明專利]一種蛋白材料固定L-TA與L-TAAAS的制備方法與其在產去甲腎上腺素上的應用

在審

• 申請號: 202310201925.1
• 申請日: 2023-03-06
• 公開（公告）號: CN116042596A
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 李輝;楊繼宇;胡鑫峰;侯晨馨;儲艷;王藝潼;陳可泉;王昕
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N11/089
• 分類號: C12N11/089;C12N9/88;C12P13/00
• 代理公司: 南京擎天知識產權代理事務所(普通合伙) 32465
• 代理人: 馬嚴龍

1.一種蛋白材料固定L-TA與L-TAAAS的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，室溫下，取1?mL?10-100?mg/mL的卵清蛋白溶液,?50-300?rpm下加入5?mLDMSO、最后加入50?mmoL、濃度為50-75?mmol/L?Tris-HCl緩沖溶液補至11?mL，形成白色沉淀后；提高轉速至300-600?rpm反應30?min得白色懸濁液，以4000-8000?rpm離心洗滌3次，每次洗滌10min，得非質子極性溶劑介導的納米材料；

步驟2,將非質子極性溶劑介導的納米材料加入同體積的水分散后，，加入L-蘇氨酸醛縮酶，且L-蘇氨酸醛縮酶的終濃度為1-4?g/L，25?℃-40?℃下恒溫攪拌12?H轉速300轉，之后用PBS緩沖液洗滌3次，冷凍干燥到恒重，得固定化L-蘇氨酸脫羧酶；

步驟3，取20-80?μL?1?mol/L二甲基咪唑，金屬離子20-80μL，L-芳香族氨基酸脫羧酶，最后加入純水至5ml，其中，L-芳香族氨基酸脫羧酶的終濃度為1?g/L-4?g/L?將配好的反應體系放入磁力攪拌器，反應30?min，離心洗滌，收集上清液進行蛋白檢測，計算蛋白量和固載率，同時取最后一次離心的沉淀，冷凍干燥到恒重，獲得沸石咪唑酯骨架結構材料包埋的固定化L-芳香族氨基酸脫羧酶。

2.根據權利要求1所述的一種蛋白材料固定L-TA與L-TAAAS的制備方法，其特征在于，步驟1中卵清蛋白溶液的濃度為60?mg/mL，所述Tris-HCl緩沖溶液濃度為50?mmol/L。

3.根據權利要求1所述的一種蛋白材料固定L-TA與L-TAAAS的制備方法，其特征在于，步驟3中固定L-芳香族氨基酸脫羧酶時，二甲基咪唑的加入量為80?μL，金屬離子為Zn²⁺,加入量為40?μL。

4.根據權利要求1所述的一種蛋白材料固定L-TA與L-TAAAS的制備方法，其特征在于，L-TA的固定化酶終濃度為2?g/L，L-芳香族氨基酸脫羧酶固定化酶終濃度為2?g/L。

5.基于權利要求1所述的沸石咪唑酯骨架結構材料包埋的固定化L-芳香族氨基酸脫羧酶在生產去甲腎上腺素上的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，生產去甲腎上腺素的反應體系的生產溫度為20-45℃。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，生產去甲腎上腺素的反應體系的生產溫度為反應體系的生產溫度為37℃。