[發明專利]一種線粒體靶向非諾貝特酸、構建方法及應用

在審

• 申請號: 202310185036.0
• 申請日: 2023-03-01
• 公開（公告）號: CN116350795A
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 袁阿虎;胡一橋;吳錦慧;汪鈺翔;王巍然
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: A61K47/54
• 分類號: A61K47/54;A61K31/192;A61K45/06;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京鼎云升知識產權代理事務所(普通合伙) 11495
• 代理人: 喬靜

本發明提供了一種線粒體靶向非諾貝特酸，所述線粒體靶向非諾貝特酸為三苯基膦非諾貝特酸偶聯物。構建線粒體靶向非諾貝特酸的方法，采用氨基三苯基膦與非諾貝特酸偶聯合成線粒體靶向非諾貝特酸。具體步驟包括：將非諾貝特酸溶解于含有三乙胺的二氯甲烷中；再加入氨基三苯基膦、1?羥基苯并三唑和EDCI，得到混合物；洗滌、旋轉蒸發得到線粒體靶向非諾貝特酸。本發明線粒體靶向非諾貝特酸能高效地抑制呼吸鏈復合物I，并產生大量的mtROS，其細胞毒作用是非諾貝特的近10倍，并展示出腫瘤細胞的特異性殺傷。線粒體靶向非諾貝特酸還能引起鈣網蛋白膜轉位和I?IFN分泌，誘導腫瘤原位疫苗效應，并與免疫檢查點阻斷療法協同治療腫瘤。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種線粒體靶向非諾貝特酸、構建方法及應用。

背景技術

盡管目前免疫檢查點阻斷(immune?checkpoint?blockade，ICB)療法已經給腫瘤治療模式帶來了巨大改變，但仍需要尋找新的聯合治療策略以增強其在免疫原性較弱的腫瘤中的效果。在這方面，腫瘤原位疫苗接種受到了巨大的關注。腫瘤原位疫苗是指局部腫瘤經適當治療后可被轉化為腫瘤抗原和佐劑的儲存庫，并從原位啟動能針對遠處病變的全身免疫應答的形成。有效的原位疫苗接種應協調好以下幾個免疫事件，其中包括腫瘤抗原的原位暴露與被攝取，腫瘤特異性CD8⁺T細胞反應的啟動和免疫活性腫瘤微環境(tumormicroenvironment，TME)的形成。抗原提呈細胞(Antigenpresenting?cells，APC)吞噬瀕死的腫瘤細胞是抗腫瘤免疫作用激活的第一步。免疫原性腫瘤細胞死亡可導致鈣網蛋白(CRT)轉位到腫瘤細胞表面，向APC釋放“吃我”信號，從而引起更高效的抗原攝取。另一方面，I型干擾素(type?I?interferon，IFN-I)是交叉呈遞外源性抗原所必需的，它與CD8⁺T細胞依賴性反應的產生密切相關。IFN-I可以通過維持APC吞噬體的較高pH值引起外源性抗原的消化不良，使抗原可以逃逸到細胞質中，被蛋白酶體降解然后交叉呈遞。此外，IFN-I還可強化免疫細胞功能，解除免疫抑制性TME，以實現最佳的抗腫瘤免疫啟動。因此，同時誘導CRT暴露和IFN-I分泌對于原位疫苗接種至關重要。

由于內質網-線粒體生物膜的存在，線粒體活性氧(mtROS)可以擴散到內質網(ER)并潛在地導致其發生應激反應，這可能進一步觸發一系列包括CRT暴露的未折疊蛋白反應(unfolded?protein?response，UPR)。同時，線粒體內含有多種損傷相關分子模式(damageassociated?molecular?pattern，DAMP)。例如，細胞色素C、血紅素以及線粒體DNA(mtDNA)是刺激多種模式識別受體(pattern?recognition?receptor，PRR)的典型炎癥因子。值得一提的是，有研究表明mtDNA可以從應激的線粒體(例如，氧化損傷)逃逸到細胞質中，并且激活cGAS-STING途徑以合成和分泌IFN-I。因此，增加mtROS生成，從而協同促進CRT的暴露和mtDNA的泄漏以促進IFN-I分泌的策略或許是可行的。

非諾貝特(Fenofibrate，FF)是FDA批準的降脂藥物，其原理是通過其體內代謝物非諾貝特酸(fenofibric?acid，FFa)激活細胞內PPARα信號通路來降低細胞的脂質水平。近年來，一些體外研究表明，未水解的FF可以抑制線粒體呼吸鏈復合物I的活力，以加強電子傳遞鏈中電子的泄露，從而促進線粒體活性氧(mtROS)的產生并殺傷腫瘤細胞。然而，體內應用的效果卻不盡人意，其原因可能與體內高表達的酯酶有關。這些酯酶會迅速地將大部分FF水解成為FFa，而由于非諾貝特酸分子中的羧基帶負電，無法有效蓄積在線粒體內，因此無法發揮對復合物I的抑制作用。這種代謝性質潛在地限制了非諾貝特在體內介導mtROS產生并使得相關研究僅停留在體外階段。

為了擺脫這一限制，本申請對非諾貝特酸進行線粒體靶向修飾以有效提高其抗腫瘤功能，為將非諾貝特酸在腫瘤治療中的應用提供了理論基礎與數據支撐。

發明內容