[發明專利]一種檢測3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202310175200.X
• 申請日: 2023-02-28
• 公開（公告）號: CN116200545A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 唐娜娜;曾南方;李晏;閔湘菱;劉佳宇;程陳凱;寧茂;顏其貴
• 申請（專利權）人: 巨星農牧有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 成都欣圣知識產權代理有限公司 51292
• 代理人: 易丹

本發明涉及分子生物技術領域，公開了一種檢測3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒及方法，該試劑盒包括分別用于檢測ASFV、PRRSV和PEDV三種病毒的引物及探針，該方法采用該試劑盒進行。本發明提供的檢測3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒及方法，能快速、有效地同時檢測ASFV、PRRSV和PEDV三種病毒，重復性、穩定性和特異性好，靈敏度高，用于豬場樣品檢測時，可有效降低檢測成本，提高檢測效率。

技術領域

本發明涉及分子生物技術領域，尤其涉及一種檢測3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒及方法。

背景技術

豬場生物安全防控，要求人員入場前進行隔離檢測，進場物資、車輛等進行非洲豬瘟病毒（African?Swine?fever?virus，ASFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcinereproductive?and?respiratory?syndrome?virus，PRRSV）和豬流行性腹瀉病毒（porcineepidemic?diarrhea?virus，PEDV）等檢測。

目前主要采用試劑盒分別檢測上述每一種病毒，如需同時檢測ASFV、PRRSV和PEDV三種病毒時，需要使用三種商品化試劑盒和三臺熒光定量PCR儀同時進行檢測，存在檢測效率低，成本高，耗費人力等問題。使得目前多數豬場對人員、車輛、物資等進行檢測時，只檢測了ASFV和PEDV兩種病毒，多數情況下未檢測PRRSV，因此存在檢測覆蓋不全面，具有感染隱患的問題，且檢測時還是需要使用到多種試劑盒分別進行檢測，成本仍然較高，且效率交底。目前還未見采用Taqman熒光定量PCR方法同時檢測ASFV、PRRSV和PEDV三種病毒的報道。

發明內容

針對上述現有技術的不足，本發明提供了一種檢測3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒和方法，該試劑盒能同時檢測ASFV、PRRSV和PEDV三種病毒，重復性和穩定性好，靈敏度高，用于豬場樣品檢測，可有效降低檢測成本，提高檢測效率。

為實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

一種檢測3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒，所述三種病毒為ASFV、PRRSV和PEDV；

所述試劑盒包括分別檢測ASFV、PRRSV和PEDV的引物及探針；

用于檢測ASFV的上引物ASFV-F為SEQ?ID?NO.1，下游引物ASFV-R為SEQ?ID?NO.2，探針ASFV-probe為SEQ?ID?NO.3；

用于檢測PRRSV的上游引物PRRSV-F為SEQ?ID?NO.4，下游引物PRRSV-R為SEQ?IDNO.5，探針PRRSV-probe為SEQ?ID?NO.6；

用于檢測PEDV的上游引物PEDV-F為SEQ?ID?NO.7，下游引物PEDV-R為SEQ?IDNO.8，探針PEDV-probe為SEQ?ID?NO.9；

在本申請的一種實施例中，所述ASFV-probe的5’端結合有熒光發生基團FAM，3’端結合有熒光猝滅基團TAMRA；

所述PRRSV-probe的5’端結合有熒光發生基團VIC，3’端結合有熒光猝滅基團BHQ1；

所述PEDV-probe的5’端結合有熒光發生基團ROX，3’端結合有熒光猝滅基團BHQ2。

在本申請的一種實施例中，還包括商品化的2×One?Step?U⁺?Mix、One?Step?U⁺Enzyme?Mix和RNase-free?ddH₂O。

在本申請的一種實施例中，還包括陽性模板，所述陽性模板為構建的三重陽性質粒，所述三重陽性制粒包括核苷酸序列SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.11和SEQ?ID?NO.12。