[發(fā)明專利]一種檢測(cè)3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310175200.X
• 申請(qǐng)日: 2023-02-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116200545A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐娜娜;曾南方;李晏;閔湘菱;劉佳宇;程陳凱;寧茂;顏其貴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 巨星農(nóng)牧有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 成都欣圣知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51292
• 代理人: 易丹

1.一種檢測(cè)3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述三種病毒為ASFV、PRRSV和PEDV；

所述試劑盒包括分別檢測(cè)ASFV、PRRSV和PEDV的引物及探針；

用于檢測(cè)ASFV的上引物ASFV-F為SEQ?ID?NO.1，下游引物ASFV-R為SEQ?ID?NO.2，探針ASFV-probe為SEQ?ID?NO.3；

用于檢測(cè)PRRSV的上游引物PRRSV-F為SEQ?ID?NO.4，下游引物PRRSV-R為SEQ?ID?NO.5，探針PRRSV-probe為SEQ?ID?NO.6；

用于檢測(cè)PEDV的上游引物PEDV-F為SEQ?ID?NO.7，下游引物PEDV-R為SEQ?ID?NO.8，探針PEDV-probe為SEQ?ID?NO.9。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述ASFV-probe的5’端結(jié)合有熒光發(fā)生基團(tuán)FAM，3’端結(jié)合有熒光猝滅基團(tuán)TAMRA；

所述PRRSV-probe的5’端結(jié)合有熒光發(fā)生基團(tuán)VIC，3’端結(jié)合有熒光猝滅基團(tuán)BHQ1；

所述PEDV-probe的5’端結(jié)合有熒光發(fā)生基團(tuán)ROX，3’端結(jié)合有熒光猝滅基團(tuán)BHQ2。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，還包括商品化的2×One?Step?U⁺?Mix、One?Step?U⁺?Enzyme?Mix和RNase-free?ddH₂O。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，還包括陽(yáng)性模板，所述陽(yáng)性模板為構(gòu)建的三重陽(yáng)性質(zhì)粒，所述三重陽(yáng)性制粒包括核苷酸序列SEQID?NO.10、SEQ?ID?NO.11和SEQ?ID?NO.12。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)3種病毒的Taqman熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述引物ASFV-F和ASFV-R能擴(kuò)增出ASFV基因組中的K196R基因，所述K196R基因的核苷酸序?yàn)镾EQ?ID?NO.10；

所述引物PRRSV-F和PRRSV-R能擴(kuò)增出PRRSV基因組中的M基因，所述M基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.11；

所述引物PEDV-F和PEDV-R能擴(kuò)增出PEDV基因組中的N基因，所述N基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.12。

6.一種檢測(cè)3種病毒的Taqman熒光定量PCR方法，其特征在于，采用如權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的Taqman熒光定量PCR試劑盒。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)3種病毒的Taqman熒光定量PCR方法，其特征在于，所述方法包括配置熒光定量PCR檢測(cè)體系，所述檢測(cè)體系中引物ASFV-F、ASFV-R、PRRSV-F、PRRSV-R、PEDV-F和PEDV-R的濃度均為400nmol/L。