[發(fā)明專利]一種胰腺癌免疫治療耐藥細(xì)胞系及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310167137.5
• 申請日: 2023-02-27
• 公開（公告）號: CN115975942B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王飛;陳大衛(wèi);尚士潔;王瑞陽;張晶鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院（山東省腫瘤防治研究院;山東省腫瘤醫(yī)院）
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11562
• 代理人: 程小芳

本發(fā)明公開了一種胰腺癌免疫治療耐藥細(xì)胞系及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。所述胰腺癌免疫治療耐藥細(xì)胞系已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2023年1月8日，保藏編號為CCTCCNO:C202310。通過細(xì)胞功能學(xué)實驗，發(fā)現(xiàn)該耐藥細(xì)胞系的體外增殖、遷移能力不變，能顯著抵抗T細(xì)胞的殺傷毒性；C57BL/6小鼠荷瘤實驗發(fā)現(xiàn)，該耐藥細(xì)胞系對PD?1抗體治療的耐受性顯著增加，可用于深入研究胰腺癌PD?1抗體治療耐藥的分子機制及開發(fā)相關(guān)抗腫瘤藥物，為篩選胰腺癌PD?1抗體治療耐藥的分子標(biāo)志物、設(shè)計和評估新型抗腫瘤藥物以及開發(fā)新的腫瘤治療方案等提供新材料。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種胰腺癌免疫治療耐藥細(xì)胞系及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，胰腺癌的發(fā)病率在國內(nèi)外均呈明顯的上升趨勢。胰腺癌是惡性程度很高的消化道腫瘤之一，死亡率高，預(yù)后較差。胰腺癌患者的5年總生存率不超過5％。

目前手術(shù)切除是胰腺癌患者獲得治愈機會和長期生存的唯一有效方式。但由于胰腺癌進展迅速，且早期癥狀不典型，臨床就診時大部分患者已屬中晚期。因此在診斷時可手術(shù)切除的腫瘤不超過20％，且大多數(shù)患者出現(xiàn)手術(shù)后復(fù)發(fā)的情況。新輔助治療能夠提高胰腺癌的可切除率并延長患者的總生存期。但即使是局部可切除的胰腺癌患者，5年總生存率也僅約為25％。基于吉西他濱的化療是胰腺癌的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)科治療方法，吉西他濱與奧沙利鉑、伊立替康、氟尿嘧啶的聯(lián)合使用可以降低胰腺癌死亡率，但會增加藥物引起的毒性副作用。因此，胰腺癌急需新的更有效的治療方式。

近年來，以免疫檢查點抑制劑PD-L1/PD-1抗體為代表的免疫治療方法在多種癌癥治療中取得了顯著的效果，但在胰腺癌的治療中并沒有展現(xiàn)出明顯的臨床獲益。胰腺癌對免疫治療呈現(xiàn)顯著的原發(fā)耐藥性，極大限制了免疫治療的應(yīng)用。研究胰腺癌免疫治療耐藥的分子機制，鑒別關(guān)鍵生物標(biāo)志物，從而選取更加合適的免疫治療方案，有利于提高患者生存率；同時篩選新的藥物靶點，繼而開發(fā)免疫治療與靶向治療的聯(lián)合療法，能夠為胰腺癌的治療提供新的選擇。而目前尚無對PD-1抗體耐藥的胰腺癌細(xì)胞株。因此，構(gòu)建PD-1抗體耐藥的胰腺癌細(xì)胞株顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種胰腺癌免疫治療耐藥細(xì)胞系及其制備方法和應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明獲得的耐藥細(xì)胞系具有穩(wěn)定的PD-1抗體耐藥性，為后期研究胰腺癌免疫治療耐藥機制，發(fā)現(xiàn)新的胰腺癌治療靶點以及開發(fā)新的胰腺癌治療手段提供基礎(chǔ)。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

本發(fā)明提供一種胰腺癌免疫治療耐藥細(xì)胞系PAN02-R，所述耐藥細(xì)胞系PAN02-R已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2023年1月8日，保藏編號為CCTCCNO:C202310，地址為中國武漢武漢大學(xué)，分類命名小鼠胰腺癌細(xì)胞PAN02-R。

進一步地，所述耐藥細(xì)胞系PAN02-R的構(gòu)建方法包括以下步驟：

(1)利用胰腺癌細(xì)胞系PAN02構(gòu)建C57BL/6小鼠皮下瘤模型，給予免疫檢查點PD-1抗體治療，篩選治療后體積最大的腫瘤；

(2)無菌條件下分離篩選得到的體積最大的腫瘤組織，提取腫瘤原代細(xì)胞，對腫瘤原代細(xì)胞進行體外培養(yǎng)并傳代，利用所述腫瘤原代細(xì)胞繼續(xù)構(gòu)建小鼠皮下瘤模型，給予免疫檢查點PD-1抗體治療，篩選治療后體積最大的腫瘤；

(3)重復(fù)步驟(2)直至免疫檢查點PD-1抗體治療組的腫瘤體積與對照組相比無顯著差異，篩選治療組體積最大的腫瘤；

(4)無菌條件下分離步驟(3)中獲得的腫瘤組織，提取腫瘤原代細(xì)胞，對腫瘤原代細(xì)胞進行體外培養(yǎng)并傳代，即獲得胰腺癌免疫治療耐藥細(xì)胞系PAN02-R。

進一步地，在步驟(1)中，所述胰腺癌細(xì)胞系為鼠源性胰腺癌細(xì)胞系。

進一步地，在步驟(2)中，所述培養(yǎng)基為含有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基。