[發(fā)明專利]一種靈敏度提高的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法及應(yīng)用、試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310157000.1
• 申請(qǐng)日: 2023-02-23
• 公開（公告）號(hào): CN116027042A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊博;石彩娟;蔣明君;林源;陳衛(wèi)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川新健康成生物股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/573;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 成都行之智信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51256
• 代理人: 馬麗青

本發(fā)明公開了一種靈敏度提高的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法及應(yīng)用、試劑盒，檢測(cè)方法通過信號(hào)放大體系提高對(duì)待測(cè)物的檢測(cè)靈敏度；所述信號(hào)放大體系的獲取過程為：將待測(cè)物的單克隆抗體鏈接生物素，得生物素化抗體；向固相載體上鏈接鏈霉親和素抗體；鏈霉親和素抗體與鏈霉親和素反應(yīng)，生物素化抗體上的生物素與鏈霉親和素反應(yīng)，獲得待測(cè)物單克隆抗體鏈接至固相載體上的信號(hào)放大體系。本發(fā)明利用在固相載體上鏈霉親和素抗體，延展固相載體的表面反應(yīng)臂，從而消除各個(gè)抗體與抗原反應(yīng)時(shí)相互間的干擾，能夠有效提高試劑靈敏度，減少抗體用量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靈敏度提高的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法及應(yīng)用、試劑盒。

背景技術(shù)

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析方法，使用化學(xué)發(fā)光技術(shù)、抗體標(biāo)記技術(shù)制備試劑組分，通過抗原抗體間的特異性免疫反應(yīng)實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)物的定量檢測(cè)。

目前采用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)對(duì)待測(cè)物定量檢測(cè)時(shí)，是將與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的抗原用緩沖液制備成一定濃度值的校準(zhǔn)品(液體或固體)，通過測(cè)定校準(zhǔn)品制作校準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)物濃度。

現(xiàn)有的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法檢測(cè)靈敏度較低，為了提高靈敏度，通常會(huì)使用大量的抗體，但卻提高了成本。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上問題，本發(fā)明提供了一種靈敏度提高的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，并將該方法應(yīng)用于提高定量檢測(cè)GFAP試劑盒的靈敏度，還提供了定量檢測(cè)GFAP的試劑盒，大大提高了檢測(cè)靈敏度。

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種靈敏度提高的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，包括：通過信號(hào)放大體系提高對(duì)待測(cè)物的檢測(cè)靈敏度；

所述信號(hào)放大體系的獲取過程為：

將待測(cè)物的單克隆抗體鏈接生物素，得生物素化抗體；

向固相載體上鏈接鏈霉親和素抗體；

鏈霉親和素抗體與鏈霉親和素反應(yīng)，生物素化抗體上的生物素與鏈霉親和素反應(yīng)，獲得待測(cè)物單克隆抗體鏈接至固相載體上的信號(hào)放大體系。

本發(fā)明中，通過向固相載體上鏈接鏈霉親和素抗體，然后再與鏈霉親和素特異性反應(yīng)，可將鏈霉親和素鏈接至固相載體上。將待測(cè)物單克隆抗體鏈接生物素，通過生物素與鏈霉親和素間的高親合力，可將待測(cè)物單克隆抗體鏈接至固相載體上。待測(cè)物可為GFAP或UCH-L1。

由于生物素與親和素之間放大效應(yīng)可提升信號(hào)值，但因一個(gè)親和素可結(jié)合四個(gè)生物素化抗體，使得固相周圍空間擁擠，反應(yīng)受到抑制，尤其在檢測(cè)大分子物質(zhì)時(shí)，影響更為明顯。本發(fā)明利用在固相載體上鏈霉親和素抗體，延展固相載體的表面反應(yīng)臂，從而消除各個(gè)抗體與抗原反應(yīng)時(shí)相互間的干擾，能夠有效提高試劑靈敏度，減少抗體用量。既提升檢測(cè)性能，又降低成本。

在一可選的實(shí)施例中，所述固相載體采用磁珠微粒。

在一可選的實(shí)施例中，包括：

(1)制備磁珠組分，所述磁珠組分包括由磁珠、鏈霉親和素抗體、鏈霉親和素、待測(cè)物單克隆抗體1、生物素酯為原料形成的信號(hào)放大體系；

(2)制備酶組分；

(3)將磁珠組分、待測(cè)物、酶組分孵育，形成免疫復(fù)合物，清洗，與底物反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，計(jì)算待測(cè)物濃度。

在一可選的實(shí)施例中，所述磁珠組分的制備過程為：

(1)將用緩沖液透析過夜后的待測(cè)物單克隆抗體1與生物素酯按比例混合反應(yīng)，得生物素化抗體；

(2)將磁珠清洗活化后，與鏈霉親和素抗體偶聯(lián)，封閉，磁珠磁分離；

(3)將(2)中磁分離后的磁珠、鏈霉親和素、生物素化抗體進(jìn)行包被；

(4)對(duì)包被產(chǎn)物室溫封閉，緩沖液清洗，重懸磁珠配制工作液。