[發明專利]一種靈敏度提高的化學發光檢測方法及應用、試劑盒

在審

• 申請號: 202310157000.1
• 申請日: 2023-02-23
• 公開（公告）號: CN116027042A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 楊博;石彩娟;蔣明君;林源;陳衛
• 申請（專利權）人: 四川新健康成生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/573;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 成都行之智信知識產權代理有限公司 51256
• 代理人: 馬麗青

1.一種靈敏度提高的化學發光檢測方法，其特征在于，通過信號放大體系提高對待測物的檢測靈敏度；

所述信號放大體系的獲取過程為：

將待測物的單克隆抗體鏈接生物素，得生物素化抗體；

向固相載體上鏈接鏈霉親和素抗體；

鏈霉親和素抗體與鏈霉親和素反應，生物素化抗體上的生物素與鏈霉親和素反應，獲得待測物單克隆抗體鏈接至固相載體上的信號放大體系。

2.根據權利要求1所述的一種靈敏度提高的化學發光檢測方法，其特征在于，所述固相載體采用磁珠微粒。

3.根據權利要求2所述的一種靈敏度提高的化學發光檢測方法，其特征在于，包括：

(1)制備磁珠組分，所述磁珠組分包括由磁珠、鏈霉親和素抗體、鏈霉親和素、待測物單克隆抗體1、生物素酯為原料形成的信號放大體系；

(2)制備酶組分；

(3)將磁珠組分、待測物、酶組分孵育，形成免疫復合物，清洗，與底物反應產生光信號，計算待測物濃度。

4.根據權利要求3所述的一種靈敏度提高的化學發光檢測方法，其特征在于，所述磁珠組分的制備過程為：

(1)將用緩沖液透析過夜后的待測物單克隆抗體1與生物素酯按比例混合反應，得生物素化抗體；

(2)將磁珠清洗活化后，與鏈霉親和素抗體偶聯，封閉，磁珠磁分離；

(3)將(2)中磁分離后的磁珠、鏈霉親和素、生物素化抗體進行包被；

(4)對包被產物室溫封閉，緩沖液清洗，重懸磁珠配制工作液。

5.根據權利要求4所述的一種靈敏度提高的化學發光檢測方法，其特征在于，所述待測物單克隆抗體1與生物素酯按1mg抗體：(1.33uL～13.3uL)10mmol/L生物素酯的比例混合反應。

6.根據權利要求4所述的一種靈敏度提高的化學發光檢測方法，其特征在于，所述磁分離后的磁珠、鏈霉親和素、生物素化抗體按照1mg:(1ug～10ug):(4ug～40ug)的比例進行包被。

7.根據權利要求3所述的一種靈敏度提高的化學發光檢測方法，其特征在于，所述酶組分的制備過程為：

(1)將待測物單克隆抗體2、堿性磷酸酶透析過夜；

(2)將透析過夜后的待測物單克隆抗體2中加入SMCC溶液，反應，透析過夜；

將透析過夜后的堿性磷酸酶中加入2-IT溶液，反應，透析過夜；

(3)將(1)和(2)的產物混合進行反應，制備工作液。

8.根據權利要求7所述的一種靈敏度提高的化學發光檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，(1)和(2)的產物按照體積比為1:1～2:1混合反應。

9.根據權利要求1～8任一項所述的化學發光檢測方法在提高定量檢測GFAP試劑盒靈敏度或定量檢測UCH-L1試劑盒中的應用。

10.一種試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1～8任一項所述的信號放大體系。