[發(fā)明專利]一種化學(xué)成分限定培養(yǎng)基及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310154948.1
• 申請日: 2023-02-22
• 公開（公告）號: CN116004517A
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王延濤;李國軍;戴秀秀;宋義高;吳書音
• 申請（專利權(quán)）人: 上海邁邦生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/02;C12N15/85
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 宋家會

本申請?zhí)峁┮环N化學(xué)成分限定培養(yǎng)基及應(yīng)用，涉及細(xì)胞工程技術(shù)領(lǐng)域。該化學(xué)成分限定培養(yǎng)基由氨基酸、脂類、維生素、糖類、有機(jī)化合物和無機(jī)化合物組成，配方在營養(yǎng)成分上全面，并且化學(xué)成分限定培養(yǎng)基成分確定，無動物源，不含蛋白質(zhì)或生長因子，支持多種不同類型的HEK293細(xì)胞的培養(yǎng)，具有更好的原材料可追溯性和更好的批次間一致性，有助于工藝性能的一致性。本申請?zhí)峁┑幕瘜W(xué)成分限定培養(yǎng)基能夠用于不同細(xì)胞的快速增殖和高密度培養(yǎng)，能夠有效進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)，將蛋白表達(dá)量提高到g/L級別以上的水平，易于放大培養(yǎng)規(guī)模，適用于平板、搖瓶、TPP管、Wave及其他反應(yīng)器，使用方便。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及細(xì)胞工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種化學(xué)成分限定培養(yǎng)基及應(yīng)用。

背景技術(shù)

哺乳動物細(xì)胞是重組治療性蛋白、疫苗、抗癌藥物和其他臨床相關(guān)藥物等生物制藥產(chǎn)品的重要生產(chǎn)平臺，常用哺乳動物細(xì)胞系如CHO細(xì)胞，HEK293細(xì)胞，Vero細(xì)胞，MDCK細(xì)胞等。哺乳動物細(xì)胞的主要優(yōu)點(diǎn)是可用于產(chǎn)生含有多種翻譯后修飾，例如糖基化、乙酰化、硫酸酯化和磷酸化等。

其中，HEK293細(xì)胞是所有人類細(xì)胞系中最常用的宿主細(xì)胞之一。目前，HEK293細(xì)胞已被廣泛應(yīng)用于多個領(lǐng)域，成為蛋白質(zhì)、疫苗、抗癌藥物和重組腺病毒載體生產(chǎn)的強(qiáng)大載體和新平臺，為適應(yīng)不同平臺的需求，HEK293具有不同的亞型及應(yīng)用方向。HEK293細(xì)胞作為宿主細(xì)胞有以下幾個原因：(1)用于轉(zhuǎn)染生產(chǎn)重組蛋白，具有較高的轉(zhuǎn)染效率；(2)用于生物制藥，可以進(jìn)行大規(guī)模懸浮培養(yǎng)；(3)具備所有人源蛋白翻譯后修飾的能力，可生產(chǎn)與天然人源蛋白最相似的蛋白質(zhì)；(4)可快速且高細(xì)胞密度的生長，培養(yǎng)方式及代謝和基因工程的靈活性，使其成為一種高效的生物治療藥物的生產(chǎn)工具；(5)因與早期分化神經(jīng)元相似，在體外更容易受到環(huán)境因素的影響，常被用作新藥發(fā)現(xiàn)和毒性測試的模型。

然而，目前市售的HEK293培養(yǎng)基多是含有血清成分的傳統(tǒng)培養(yǎng)基并且在抗體的瞬轉(zhuǎn)表達(dá)培養(yǎng)中產(chǎn)量比較低。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，含血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基表現(xiàn)出越來越多的劣勢，比如：血清成分復(fù)雜，不同批次間成分比例有偏差，其中可能含有一定量的有毒物質(zhì)和抑制因子，影響細(xì)胞的代謝和實(shí)驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性等。

新一代合成培養(yǎng)基—化學(xué)成分限定培養(yǎng)基(Chemically?Defined?Medium，CDM)的出現(xiàn)解決了這些問題，化學(xué)成分限定培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基中的所有成分都是明確的，它不含有動物蛋白，沒有添加植物水解物，而是使用了一些已知結(jié)構(gòu)與功能的小分子化合物，如短肽、植物激素等，這種培養(yǎng)基更有利于分析細(xì)胞的分泌產(chǎn)物，更好的原材料可追溯性和更好的批次間一致性，其有助于工藝性能的一致性。但是現(xiàn)有的化學(xué)成分限定培養(yǎng)基由于配方不夠全面，在培養(yǎng)宿主細(xì)胞時，依然存在細(xì)胞活力不夠好，產(chǎn)物表達(dá)不夠多的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本申請的目的在于提供一種化學(xué)成分限定培養(yǎng)基，旨在解決現(xiàn)有的HEK293細(xì)胞化學(xué)成分限定培養(yǎng)基由于配方不夠全面，在培養(yǎng)宿主細(xì)胞時，存在細(xì)胞活力不夠好，產(chǎn)物表達(dá)不夠多的問題。

為實(shí)現(xiàn)以上目的，本申請?zhí)峁┮环N化學(xué)成分限定培養(yǎng)基，由氨基酸、脂類、維生素、糖類、有機(jī)化合物和無機(jī)化合物組成；其中，氨基酸是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本原料；脂類是油、脂肪、類脂的總稱；類脂包括磷脂，固醇類，脂蛋白，糖脂等，類脂是構(gòu)成機(jī)體組織較穩(wěn)定的脂；維生素做為細(xì)胞生長因子；糖類提供細(xì)胞生長所需的碳源；

所述氨基酸的組分和用量為：

L-a-氨基-n-丁酸5～11mg/L；例如可以為(5、6、7、8、9、10或11)mg/L；

L-半胱氨酸鹽酸一水100～220mg/L；例如可以為(100、120、140、160、180、200或220)mg/L；

L-苯丙氨酸200～320mg/L；例如可以為(200、220、240、260、280、300或320)mg/L；