[發明專利]mRNA的制備方法在審
| 申請號： | 202310136404.2 | 申請日： | 2023-02-20 |
| 公開（公告）號： | CN116286793A | 公開（公告）日： | 2023-06-23 |
| 發明（設計）人： | 張海峰;陳慧;劉欣;宋恒遠;馬宏丹;張勁松;代亞東;張勝 | 申請（專利權）人： | 蘇州博騰生物制藥有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 華進聯合專利商標代理有限公司 44224 | 代理人： | 蘇婕 |
| 地址： | 215021 江蘇省蘇州市蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | mrna 制備 方法 | ||
1.一種mRNA的制備方法，其特征在于，包括如下制備步驟：
提供線性DNA轉錄模板；所述線性DNA轉錄模板包括正義鏈和反義鏈；所述正義鏈包括啟動子和目的DNA，所述啟動子與所述目的DNA之間設有限制性酶切位點；
所述線性DNA轉錄模板于體外轉錄體系中進行第一階段轉錄，制備第一階段轉錄產物；
向所述第一階段轉錄產物中加入識別所述限制性內切酶位點的限制性內切酶X，進行第二階段轉錄，制備所述mRNA。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述限制性內切酶X選自為SpeⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的一種。
3.根據權利要求1所述的mRNA的制備方法，其特征在于，第二階段轉錄的時間為15min～120min。
4.根據權利要求1至3任一項所述的mRNA的制備方法，其特征在于，所述體外轉錄體系包括IVT轉錄體系。
5.根據權利要求1至3任一項所述的mRNA的制備方法，其特征在于，第一階段轉錄的時間為15min～120min。
6.根據權利要求1至3任一項所述的mRNA的制備方法，其特征在于，所述啟動子選自T7啟動子、T3啟動子和SP6啟動子的一種。
7.根據權利要求1至3任一項所述的mRNA的制備方法，其特征在于，所述目的DNA選自功能性基因、基因雜合體、基因變體和雜合體的一種或幾種。
8.根據權利要求1至3任一項所述的制備方法，其特征在于，所述線性DNA轉錄模板的制備步驟包括：
構建環狀質粒DNA；
采用限制性內切酶Y酶切所述環狀質粒DNA，制備所述線性DNA轉錄模板；
所述限制性內切酶Y與所述限制性內切酶X識別的酶切位點不同；可選地，所述限制性內切酶Y選自BspQⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的一種。
9.根據權利要求8所述的mRNA的制備方法，其特征在于，所述線性DNA轉錄模板的制備步驟還包括對獲得的所述線性DNA轉錄模板進行純化處理。
10.根據權利要求1至3和9任一項所述的mRNA的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括：對第二階段轉錄完成后，向所得產物中加入DNaseⅠ酶，酶切消化所述線性DNA轉錄模板，并對所得酶切消化產物進行純化處理。
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