[發明專利]抗體組合物及應用、檢測血液中YKL-40濃度的方法

在審

• 申請號: 202310135648.9
• 申請日: 2023-02-18
• 公開（公告）號: CN116223794A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 邵榮;龔偉
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬新華醫院
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;C12N9/42;C07K16/40;C12N15/866;G01N33/573;G01N33/577
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

本發明涉及YKL?40濃度檢測領域，具體而言，涉及抗體組合物及應用、檢測血液中YKL?40濃度的方法。所述的抗體組合物，包括以下組分：YKL?40重組蛋白、抗YKL?40鼠源單抗、抗YKL?40兔源多抗、山羊抗體共軛辣根過氧化酶、3,3’,5,5’?四甲基聯苯胺和硫酸。所述抗體組合物的組分與YKL?40能特異的結合和反應，可用于檢測血液或人體其他分泌物中YKL?40濃度，特異性高，靈敏性高，檢測成本低，有利于臨床病人的診斷。

技術領域

本發明涉及YKL-40濃度檢測領域，具體而言，涉及抗體組合物及應用、檢測血液中YKL-40濃度的方法。

背景技術

長期以來，癌癥是危及全世界人類健康最主要的疾病之一，全球每年近1900萬人確診為癌癥患者，每年癌癥死亡率是960萬人。因此，如何精準診斷、有效治療腫瘤是拯待急需解決的問題。在臨床診斷癌癥時，除了病人出現的體癥外，最重要的診斷一環就是腫瘤的檢測，包括損傷性與非損傷性檢測；前者有腫瘤活檢、X-射線等；后者有血液、尿液、消化道分泌液等。隨著高端科技的迅猛發展，尤其分子和基因檢測技術的不斷提升；近20年來，對腫瘤病人血液中的細胞、蛋白、DNA等檢測進行了各種嘗試，并獲得一些成就。對腫瘤病人的血液高表達蛋白有了許多報道，提出檢測血液蛋白可以作為診斷癌癥病人的標記物，比如CA125、CA19-9等抗原蛋白。但是，目前在臨床上公認為腫瘤的血液標記物，能體現腫瘤在體內的存在或進展，卻十分有限。所以，研發檢測血液蛋白的試劑盒對腫瘤的診斷有著重要的臨床價值，對指示早期治療也有著深遠意義。

YKL-40(基因名為CHI3L1)是分泌性糖蛋白，其分子由383個氨基酸構成(40KDa)，屬幾丁質酶基因家族。臨床報道YKL-40的表達與多種腫瘤惡變有顯著的正相關；例如轉移性乳腺癌、直腸癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、子宮頸癌、惡性膠質母細胞等多種實體瘤，患者的血濃度YKL-40是顯著上升；而且，高濃度YKL-40與腫瘤轉移和患者低存活率是密切相關的，提示YKL-40是腫瘤惡變的標志物。其病理機制是與腫瘤血管再生相關；能刺激乳腺癌、直腸癌、腦腫瘤等腫瘤的血管再生，從而促進腫瘤的繁殖和轉移。有文獻報道，正常人血液YKL-40濃度維持在約50納克/毫升(ng/ml),而腫瘤病人升高到100納克/毫升以上，甚至達到200-300納克/毫升。因此，在癌癥病人的診斷中，檢測血液YKL-40的濃度受到越來越多的關注。

目前，生產檢測YKL-40的試劑盒的企業，均分布于美國，每個試劑盒價格在600-1000美元，含有一個96孔板，可以檢測25個樣本(每個樣本3次重復)。如果檢測100例或更大規模病人篩選，昂貴的費用對開展臨床研究，還是病人自己承擔的費用都是重要考慮的因素。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的一個方面，涉及抗體組合物，包括以下組分：

YKL-40重組蛋白、抗YKL-40鼠源單抗、抗YKL-40兔源多抗、山羊抗體共軛辣根過氧化酶、3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺和硫酸。

所述抗體組合物的組分與YKL-40能特異的結合和反應，可用于檢測血液中YKL-40濃度，特異性高，靈敏性高，檢測成本低，有利于臨床病人的診斷。

本發明的另一個方面，還涉及試劑盒，包括所述的抗體組合物。

本發明的另一個方面，還涉及檢測血液中YKL-40濃度的方法，使用所述的抗體組合物或所述的試劑盒，包括以下步驟：

a、將抗YKL-40鼠源單抗加入至96孔板后3～5℃過夜；移去所述96孔板中的所述抗YKL-40鼠源單抗，沖洗所述96孔板；

b、向所述96孔板中加入待測血液樣本，于3～5℃冰箱過夜；移去所述96孔板中的所述待測血液樣本，沖洗所述96孔板；

c、向所述96孔板中加入抗YKL-40兔源性多抗，于3～5℃靜置過夜；移去所述96孔板中的所述抗YKL-40兔源性多抗，沖洗所述96孔板；