[發(fā)明專利]抗體組合物及應(yīng)用、檢測(cè)血液中YKL-40濃度的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310135648.9
• 申請(qǐng)日: 2023-02-18
• 公開（公告）號(hào): CN116223794A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵榮;龔偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/531
• 分類號(hào): G01N33/531;C12N9/42;C07K16/40;C12N15/866;G01N33/573;G01N33/577
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

1.抗體組合物，其特征在于，包括以下組分：

YKL-40重組蛋白、抗YKL-40鼠源單抗、抗YKL-40兔源多抗、山羊抗體共軛辣根過氧化酶、3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺和硫酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體組合物，其特征在于，所述YKL-40重組蛋白的制備方法包括以下步驟：

將YKL-40全基因序列引入到pFAST-BAC1質(zhì)粒中，然后，引入桿狀病毒質(zhì)粒，產(chǎn)生桿狀病毒傳染于昆蟲Sf9細(xì)胞，收集分泌YKL-40蛋白的細(xì)胞上清液，在所述收集分泌YKL-40蛋白的細(xì)胞上清液中分離、純化得到所述YKL-40重組蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗體組合物，其特征在于，檢測(cè)血液中YKL-40濃度的方法，所述抗YKL-40鼠源單抗的制備方法包括以下步驟：

將所述YKL-40重組蛋白注射于小鼠，分離所述小鼠脾臟的免疫B細(xì)胞，然后與小鼠淋巴瘤的腹水腫瘤細(xì)胞進(jìn)行雜交培養(yǎng)，篩選能產(chǎn)生與YKL-40蛋白特異結(jié)合的抗體雜交瘤細(xì)胞，培養(yǎng)并收集所述抗體雜交瘤細(xì)胞的上清液，在所述抗體雜交瘤細(xì)胞的上清液中分離、純化得到所述抗YKL-40鼠源單抗。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗體組合物，其特征在于，所述抗YKL-40兔源多抗的制備方法包括以下步驟：

將所述YKL-40重組蛋白C末端的肽段注射于兔的血液中，收集所述兔的血清；從所述兔的血清中分離、純化得到所述抗YKL-40兔源多抗；

優(yōu)選地，由C端至N端，所述YKL-40重組蛋白C末端的肽段包括：CGQDLRFPLTNAIKDALAAT。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體組合物，其特征在于，所述抗YKL-40鼠源單抗的濃度為0.3～1.0mg/ml；

優(yōu)選地，所述抗YKL-40兔源性多抗的濃度為0.3～1.0mg/ml；

優(yōu)選地，所述山羊抗體共軛辣根過氧化酶的濃度為0.5～0.8mg/ml；

優(yōu)選地，所述3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺的濃度為0.2～0.4mM；

優(yōu)選地，所述硫酸的濃度為1.8～2.2M。

6.試劑盒，其特征在于，包括如權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的抗體組合物。

7.檢測(cè)血液中YKL-40濃度的方法，使用權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的抗體組合物或權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，包括以下步驟：

a、將抗YKL-40鼠源單抗加入至96孔板后3～5℃過夜；移去所述96孔板中的所述抗YKL-40鼠源單抗，沖洗所述96孔板；

b、向所述96孔板中加入待測(cè)血液樣本，于3～5℃冰箱過夜；移去所述96孔板中的所述待測(cè)血液樣本，沖洗所述96孔板；

c、向所述96孔板中加入抗YKL-40兔源性多抗，于3～5℃靜置過夜；移去所述96孔板中的所述抗YKL-40兔源性多抗，沖洗所述96孔板；

d、向所述96孔板中加入山羊抗體共軛辣根過氧化酶，室溫放置1.5～2.5h；移去所述96孔板中的所述山羊抗體共軛辣根過氧化酶，向所述96孔板中加入3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺，進(jìn)行震蕩培養(yǎng)；

e、向所述震蕩培養(yǎng)結(jié)束后的培養(yǎng)體系中加入硫酸，在450nm波長處檢測(cè)加入所述硫酸后培養(yǎng)體系的吸光度；

f、利用YKL-40重組蛋白制作YKL-40濃度與吸光度相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)血液中YKL-40濃度的方法，其特征在于，所述抗YKL-40鼠源單抗的濃度為0.3～1.0mg/ml；

優(yōu)選地，所述抗YKL-40兔源性多抗的濃度為0.3～1.0mg/ml；

優(yōu)選地，所述山羊抗體共軛辣根過氧化酶的濃度為0.5～0.8mg/ml；

優(yōu)選地，所述3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺的濃度為0.2～0.4mM；

優(yōu)選地，所述硫酸的濃度為1.8～2.2M。