[發明專利]增加植物中病毒樣顆粒的產率

在審

• 申請號: 202310130025.2
• 申請日: 2012-09-28
• 公開（公告）號: CN116218900A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 馬克-安德烈·德奧斯特;馬農·科圖雷;路易斯-菲利普·韋齊納
• 申請（專利權）人: 麥迪卡格公司
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/44;C07K14/11;A61K39/145;A61P31/16;A61P37/04
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張福譽;韓曉帆

本申請涉及增加植物中病毒樣顆粒的產率。提供一種在植物中生產病毒樣顆粒(VLP)的方法。該方法包括將第一核酸和第二核酸引入該植物或該植物的部分。該第一核酸包含在植物中具有活性并且有效連接到編碼病毒結構蛋白之核苷酸序列的第一調節區。第二核酸包含在植物中具有活性并且有效連接到編碼通道蛋白(例如但不限于質子通道蛋白)之核苷酸序列的第二調節區。將該植物或該植物的部分在容許該核酸表達的條件下培養，從而生產VLP。

本申請是申請號為201280047819.2的發明名稱為“增加植物中病毒樣顆粒的產率”的中國專利申請的分案申請，原申請是2012年09月28日提交的PCT國際申請PCT/CA2012/050681于2014年03月28日進入中國國家階段的申請。

技術領域

本發明涉及在植物中生產病毒蛋白。更特別地，本發明涉及在植物中生產并且增加病毒樣顆粒生產。

背景技術

流行性感冒是由正粘病毒科(orthomyxoviridae)的RNA病毒引起。這些病毒有三種類型并且它們引起三個不同類型的流行性感冒：甲型、乙型與丙型。甲型流感病毒感染哺乳動物(人、豬、雪貂、馬)以及鳥類。由于此類型病毒是已造成全世界流行病，因此對于人類是非常重要的。乙型流感病毒(又簡稱為乙型流感)僅感染人類。它偶爾引發流感的地方性爆發。丙型流感病毒亦僅感染人類。它們感染大多數年輕的人類并且鮮少造成嚴重的疾病。

疫苗接種通過在感染前誘導對象建立防御而提供對由類似物質引起之疾病的保護。通常，通過使用活的減毒形式或完整的失活形式的感染性物質作為免疫原而實現這一目的。為了避免使用全病毒(例如殺死的或減弱的病毒)作為疫苗的危險，已將重組病毒蛋白例如亞單位(subunit)實行為疫苗。肽與亞單位疫苗兩者皆受到一些潛在的限制。由于不正確的折疊或差的抗原呈遞，亞單位疫苗可能表現差的免疫原性。主要問題為確保工程蛋白質的構型模擬抗原在其自然環境中之構象的困難。必須使用適合的佐劑以及對于肽來說使用載體蛋白來加強免疫應答。此外，這些疫苗主要引起體液應答，并因此可能無法引起有效的免疫。亞單位疫苗對于可證實以完整的失活病毒提供保護的疾病經常是無效的。

病毒樣顆粒(VLP)為納入免疫原性組合物的潛在候選。VLP十分近似于成熟的病毒粒子，但它們不包含病毒的基因組物質。因此，VLP本質上為不可復制的，使得將它們作為疫苗施用是安全的。此外，可將VLP改造為在VLP的表面上表達病毒糖蛋白，這是其最天然的生理構型。此外，因為VLP類似完整的病毒粒子并且為多價顆粒結構，所以比起可溶的包膜蛋白抗原，VLP在引發對糖蛋白的中和抗體上可能是更有效。

已在植物中(WO2009/009876；WO?2009/076778；WO?2010/003225；WO?2010/003235；WO?2011/03522；WO?2010/148511；將其通過參考并入本文)，以及在昆蟲和哺乳動物系統中(Noad,R.and?Roy,P.,2003,Trends?Microbiol?11:438-44；Neumann?et?al.,2000,J.Virol.,74,547-551)生產VLP。Latham與Galarza(2001,J.Virol.,75,6154-6165)報道了在以共表達血細胞凝集素(HA)、神經氨酸酶(NA)、M1和M2基因的重組桿狀病毒感染的昆蟲細胞中流感VLP的形成。此研究證實了于真核細胞中共表達后流感病毒粒子蛋白的自組裝，以及需要M1基質蛋白供VLP產生。然而，Gomez-Puertas?et?al.(1999,J.Gen.Virol,80,1635-1645)亦顯示M2的過表達完全阻斷CAT?RNA傳輸至MDCK培養物。

M2作用為離子通道蛋白并且已顯示當過表達此蛋白質時，共表達的HA之胞內運輸被抑制，以及血細胞凝集素(HA)在細胞膜的累積減少75-80％(Sakaguchi?et?al.,1996；HenkelWeisz,1998)。此外，通過過表達M2，病毒膜蛋白在細胞膜的累積降低，因而產生的功能性VLP數目急劇降低。