[發明專利]增加植物中病毒樣顆粒的產率

在審

• 申請號: 202310130025.2
• 申請日: 2012-09-28
• 公開（公告）號: CN116218900A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 馬克-安德烈·德奧斯特;馬農·科圖雷;路易斯-菲利普·韋齊納
• 申請（專利權）人: 麥迪卡格公司
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/44;C07K14/11;A61K39/145;A61P31/16;A61P37/04
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張福譽;韓曉帆

1.一種在植物中生產病毒樣顆粒(VLP)的方法，其包括

a)將第一核酸引入所述植物或所述植物的部分，所述第一核酸包含在所述植物中具有活性且有效連接到編碼流感血細胞凝集素(HA)蛋白之核苷酸序列的第一調節區，所述流感HA蛋白選自流感B?HA和H3?HA，其中編碼所述流感HA蛋白的核苷酸序列：

(i)與選自SEQ?ID?NO:28、SEQ?ID?NO:51和SEQ?ID?NO:61的序列具有至少70％的序列同一性；

(ii)與選自SEQ?ID?NO:43和SEQ?ID?NO:57下劃線部分的序列具有至少70％的序列同一性；

(iii)與選自SEQ?ID?NO:23和SEQ?ID?NO:46的序列具有至少70％的序列同一性；或者

其中所述流感HA蛋白氨基酸序列為：

(iv)如SEQ?ID?NO：41和SEQ?ID?NO：58中的至少一個所示；

(v)如SEQ?ID?NO：30、SEQ?ID?NO：54和SEQ?ID?NO：64中的至少一個所示；

(vi)如SEQ?ID?NO：25和SEQ?ID?NO：48中的至少一個所示；

b)將第二核酸引入所述植物或所述植物的部分，所述第二核酸包含在所述植物中具有活性且有效連接到編碼質子通道蛋白之核苷酸序列的第二調節區，其中所述質子通道蛋白是選自流感A/波多黎各/8/1934或流感A/新喀里多尼亞/20/1999的M2，和/或是M2并且包含質子通道特征序列HXXXW，和

c)將所述植物或所述植物的部分于容許所述核酸表達的條件下培養，從而生產VLP，并且其中所述VLP不包含所述質子通道蛋白。

2.權利要求1的方法，其中所述流感HA蛋白的一個或更多個蛋白水解環已被缺失。

3.權利要求1的方法，其中所述流感B?HA來自流感B/布里斯班/60/2008、B/馬來西亞/2506/2004或B/威斯康辛/1/2010。

4.權利要求3的方法，其中所述流感B?HA蛋白的一個或更多個蛋白水解環已被缺失。

5.權利要求1的方法，其中所述流感H3?HA來自流感A/珀斯/16/2009或來自流感A/維多利亞/361/2011。

6.權利要求1的方法，其中所述第一核酸包含有效連接一個或多于一個豇豆花葉病毒屬增強子的第一調節區、編碼流感血細胞凝集素(HA)蛋白質的核苷酸序列以及一個或多于一個雙生病毒擴增元件，并且將包含編碼雙生病毒復制酶之核苷酸序列的第三核酸引入所述植物或所述植物的部分。

7.權利要求6的方法，其中所述一個或多于一個豇豆花葉病毒屬增強子為豇豆花葉病毒屬UTR。

8.權利要求7的方法，其中所述豇豆花葉病毒屬UTR為豇豆花葉病毒(CPMV)UTR。

9.權利要求6的方法，其中所述一個或多于一個雙生病毒擴增元件選自豆黃矮病毒長基因間區域(BeYDV?LIR)和BeYDV短基因間區域(BeYDV?SIR)。

10.權利要求1的方法，其中在所述培養步驟(步驟c)中，所述核酸于植物中瞬時表達。

11.權利要求1的方法，其中在所述培養步驟(步驟c)中，所述核酸于植物中穩定表達。

12.權利要求1的方法，還包括下述步驟

d)收獲所述植物以及純化所述VLP。

13.權利要求1的方法，其中所述VLP不包含病毒基質、核心蛋白或通道蛋白。