[發明專利]一種牛多殺性巴氏桿菌外膜囊泡及其制備方法與應用在審
| 申請號： | 202310129089.0 | 申請日： | 2023-02-17 |
| 公開（公告）號： | CN116333921A | 公開（公告）日： | 2023-06-27 |
| 發明（設計）人： | 李劼;高潔;劉文香;李化生;張立華;張慧;穆楊 | 申請（專利權）人： | 金宇保靈生物藥品有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;A61K39/102;A61K35/74;A61P31/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 魏志恒 |
| 地址： | 010111 內蒙古自治區呼和浩*** | 國省代碼： | 內蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種牛 多殺性巴氏 桿菌 外膜囊泡 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種牛多殺性巴氏桿菌外膜囊泡，其特征在于，所述外膜囊泡為夾膜B群牛多殺性巴氏桿菌CVCC44502株分泌。
2.根據權利要求1所述的牛多殺性巴氏桿菌外膜囊泡，其特征在于，所述外膜囊泡具有雙層膜結構的囊泡狀小體，攜帶細菌外膜和周質成分，包括酶、毒力因子、細菌特異性抗原和多種病原相關分子模式。
3.根據權利要求1所述的牛多殺性巴氏桿菌外膜囊泡，其特征在于，所述外膜囊泡粒徑在200nm以內，蛋白條帶大小集中在33KDa-45?KDa之間。
4.如權利要求1-3任一所述牛多殺性巴氏桿菌外膜囊泡的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將莢膜B群牛多殺性巴氏桿菌CVCC?44502株培養到穩定期，得到菌液；
(2)將菌液10000rpm/min，4℃，離心10min，取上清過0.45μm濾膜；
(3)將過濾后的上清經兩次超高速離心，取沉淀經PBS重懸過0.22μm濾膜，得牛多殺性巴氏桿菌外膜囊泡。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述培養條件為37±1℃，時間為18-22h。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述兩次超高速離心具體為上清液超高速離心，42000rpm/min，4℃，離心2h，棄上清；用PBS緩沖液重懸沉淀，將重懸液進行第二次超高速離心，42000rpm/min，4℃，離心2h，棄上清。
7.一種預防多殺性巴氏桿菌病的疫苗，其特征在于，包括權利要求1-3任一所述的牛多殺性巴氏桿菌外膜囊泡。
8.根據權利要求7所述的預防多殺性巴氏桿菌病的疫苗，其特征在于，所述牛多殺性巴氏桿菌外膜囊泡的濃度為50μg/mL。
9.根據權利要求7所述的預防多殺性巴氏桿菌病的疫苗，其特征在于，所述疫苗在-80℃環境下凍存。
10.權利要求1-3任一所述牛多殺性巴氏桿菌外膜囊泡在預防多殺性巴氏桿菌病中的應用。
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