[發明專利]一種用于檢測水產品中甲霜靈對映體和甲霜靈酸對映體殘留的方法

在審

• 申請號: 202310109504.6
• 申請日: 2023-02-10
• 公開（公告）號: CN116008437A
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發明（設計）人: 周豪;尹怡;張媚玉;鄭光明;單奇;馬麗莎;林嘉薇;李麗春
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京博爾赫知識產權代理事務所(普通合伙) 16045
• 代理人: 王燦

本發明提供了一種用于檢測水產品中甲霜靈對映體和甲霜靈酸對映體殘留的方法，涉及分析化學領域和獸藥殘留檢測技術領域，包括以下步驟：S1.水產品的帶皮肌肉組織與乙酸乙酯混合，振蕩提取，上清液，氮吹干，用乙腈水溶液復溶；S2：采用固相萃取柱，進行凈化，收集洗脫液，氮吹干，用乙腈水溶液復溶，濾膜過濾，得待測液；S3：對所述待測液進行手性液相色譜?串聯質譜分析檢測，測得水產品中甲霜靈對映體和甲霜靈酸對映體殘留。基于液液萃取和陰離子交換固相萃取凈化，以及手性LC?MS/MS技術的高選擇性和高靈敏度特性，建立了提取方便、簡單，可操作性強，重現好和具有通用性的檢測方法。

技術領域

本發明涉及分析化學領域和獸藥殘留檢測技術領域，尤其涉及一種用于檢測水產品中甲霜靈對映體和甲霜靈酸對映體殘留的方法。

背景技術

甲霜靈是一種廣譜、高效、低毒的內吸性酰胺類殺菌劑，通常作為農藥用于防治谷物、蔬菜和水果的枯萎病、晚疫病和霜霉病等疾病。研究發現低濃度甲霜靈可抑制水霉菌絲的生長，高濃度時可殺死水霉菌。水霉病是水產養殖中危害較嚴重的疾病之一，從魚卵到成魚均可發生，嚴重影響水產養殖業的發展。甲霜靈作為禁用藥物孔雀石綠的替代藥物，在水產養殖實踐應用中顯示極好的抗水霉效果和安全性，用于預防和治療水霉菌等真菌感染引起的淡水魚類疾病。

甲霜靈結構中存在立體中心，是由一對對映體組成的手性化合物。甲霜靈的殺菌活性主要來自R-對映體，其活性大約是S-對映體的1000倍。目前，在許多國家和地區高活性的R-甲霜靈已經取代了外消旋體的使用。甲霜靈在生物體內很容易通過酯水解生成羧酸代謝物(即甲霜靈酸)，甲霜靈酸也是一種手性化合物。手性藥物對映體在生物體內的代謝、轉化等生命活動過程往往存在較大差異。因此，在對映體水平上研究手性獸藥的代謝和殘留消除，可以對手性獸藥的生態風險和食品安全風險進行更準確地評價，而建立可靠的分離分析方法成為研究手性獸藥代謝行為的基礎和關鍵。

目前，尚未制定水產品中甲霜靈的最大殘留限量標準，關于水產品中甲霜靈對映體和甲霜靈酸對映體的殘留分析方法也未見報道。為防止不規范用藥可能導致的水產品質量安全等問題，加強水產品中甲霜靈對映體和甲霜靈酸對映體的監測和殘留分析是重要和緊迫的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測水產品中甲霜靈對映體和甲霜靈酸對映體殘留的方法，基于液液萃取和陰離子交換固相萃取凈化，以及手性LC-MS/MS技術的高選擇性和高靈敏度特性，建立了提取方便、簡單，可操作性強，靈敏度高，重現好和具有通用性的檢測方法。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種用于檢測水產品中甲霜靈對映體和甲霜靈酸對映體殘留的方法，包括以下步驟：

S1.水產品的帶皮肌肉組織與乙酸乙酯按照1～3g：10mL混合，振蕩提取1～3次，合并上清液，氮吹干所述上清液后，用乙腈水溶液復溶，得待凈化液；

S2：采用固相萃取柱，對所述待凈化液進行凈化，收集洗脫液，氮吹干所述洗脫液后，用乙腈水溶液復溶，濾膜過濾，得待測液；

S3：對所述待測液進行手性液相色譜-串聯質譜分析檢測，測得水產品中甲霜靈對映體和甲霜靈酸對映體殘留；

其中，液相色譜所用色譜柱為多糖類手性色譜柱；所述質譜采用電噴霧電離正離子多反應檢測模式進行。

優選的，所述水產品為草魚、鯽魚、鯉魚、烏鱧、羅非魚和大口黑鱸中的一種。

優選的，S1中所述水產品的帶皮肌肉組織與乙酸乙酯混合為渦旋混勻，渦旋時間為0.5～2min；S1中所述每次振蕩提取時間為10～20min；S1中振蕩提取后，離心獲得上清液，離心轉速為4500～5500r/min，離心時間為3～7min；S1中氮吹在35～45℃水浴中進行，S1中所述乙腈水溶液的體積濃度為5～20％，乙腈水溶液用量為2～4mL。