[發(fā)明專利]一種同步檢測22種手足口病毒的檢測引物探針組合及基因芯片

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310101873.0
• 申請日: 2023-02-07
• 公開（公告）號: CN116286803A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝俊;葛毅媛;馬曉敏;楊瑩;黃嘉慧
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州凱普醫(yī)藥科技有限公司;武漢凱普醫(yī)學檢驗實驗室有限公司;廣東凱普生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/70;C12Q1/6837;C40B40/06;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

本發(fā)明公開了一種同步檢測22種手足口病毒的檢測引物探針組合及基因芯片，涉及病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域。22種手足口病毒包括13種柯薩奇病毒、1種腸道病毒和8種埃可病毒，檢測引物組合的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1～20所示。本發(fā)明提供的引物組合及探針組合具有檢測手足口病的病原體的類型多(達22種)，范圍廣，準確度高的優(yōu)勢。利用設(shè)計的引物和探針制備的基因芯片和基因檢測試劑盒僅通過一次試驗就能同時檢測22種手足口病毒。本發(fā)明提供的試劑盒不僅特異性好、靈敏度高，而且檢測時間短、成本低、操作方便，對開展手足口病毒的臨床篩查和輔助診斷具有重大的意義。可以在社區(qū)手足口病毒檢測和院內(nèi)病原體感染的場景中使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種同步檢測22種手足口病毒的檢測引物探針組合及基因芯片。

背景技術(shù)

手足口病(hand-foot-and-mouth?disease,HFMD)由腸道病毒感染而引起，以發(fā)熱，咽喉痛，全身不適，手、足、口腔等部位皮疹或皰疹為主要特征的常見傳染病，雖然大多數(shù)手足口病患者癥狀輕微，并且具有自限性，但仍有相當一部分患者有致死性心肺功能疾病和神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，個別重癥患者病情進展迅速，甚至可導致死亡。

手足口病致病病原體傳染源為患者或隱性感染者，主要的傳播途徑為糞-口傳播，也可經(jīng)接觸患者的皰疹液傳播，接觸病人和攜帶者的糞便、唾液和皰疹液污染的日常生活用品均可傳播此病原體，近年來的報道顯示，該病原體也可垂直傳播，導致新生兒重癥感染。人對腸道病毒普遍易感，不同年齡段均可感染發(fā)病，以5歲以下兒童為主，尤以3歲以下兒童發(fā)病率最高，該病流行無明顯的地區(qū)性，全年均可發(fā)生，一般5-7月為發(fā)病高峰。該病的潛伏期一般為2-10天，平均潛伏期為3-5天，感染者發(fā)病前的數(shù)天即可從其咽拭子樣本和糞便樣本中檢出病毒，病程為7天左右，咽部排毒可持續(xù)在發(fā)病后1-2周，而糞便排毒可持續(xù)至發(fā)病后3-5周。

引起手足口病的腸道病毒包括柯薩奇病毒A組的2、4、5、6、7、9、10、16型等，B組的1、2、3、4、5型等，腸道病毒71型及埃可病毒等，其中以EV71和CA16型較為常見。

目前，手足口病毒感染的特異性診斷方法有三種，即病毒分離鑒定、血清學檢測技術(shù)以及分子生物學技術(shù)。病毒的分離培養(yǎng)和血清學方法繁雜費時，無法滿足大量樣本的快速診斷；而分子生物學技術(shù)主要對病毒核酸進行檢測，主要包括膠體金、酶聯(lián)免疫以及熒光PCR產(chǎn)品，其中以熒光PCR法居多，但是該檢測方法具有檢測靶點少，靈敏度較低，操作繁瑣，檢測耗時，檢測儀器費用昂貴等缺陷。因此，有必要建立一種高通量、高效率、多靶點的檢測方法，以實現(xiàn)臨床快速檢測或大規(guī)模人群篩查。

雜交分析檢測技術(shù)由于其特異性高而被廣為推崇，是高密度基因芯片之核心分析方法，能在同一芯片上同時分析千萬個不同的基因片段，大大加速了研究的速度。雜交技術(shù)和PCR擴增技術(shù)結(jié)合，具有技術(shù)操作簡單、自動化程度高、序列數(shù)量大、檢測效率高、應(yīng)用范圍廣、成本相對低的特點。

雜交法能提升核酸分析的特異性，但是大多數(shù)雜交方法耗時耗力，無法達到臨床快速檢測的要求。將靈敏性高的PCR檢測技術(shù)配合特異性極高的反斑點雜交技術(shù)以一種簡單、快速且省錢的方式結(jié)合起來，利用導流雜交技術(shù)可大大提高雜交的效率，且操作方便，從而避免了傳統(tǒng)雜交方法冗長的操作過程。目前，市場上還未有獲證的多靶點手足口病毒檢測產(chǎn)品，因此，開展該項目的檢測用于人群大規(guī)模篩查具有很大的市場潛力。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種同步檢測22種手足口病毒的檢測引物探針組合及基因芯片以滿足簡單、快速檢測和大規(guī)模人群篩查的需求。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

第一方面，本發(fā)明提供了一種同步檢測22種手足口病毒的檢測引物組合，22種手足口病毒包括13種柯薩奇病毒、1種腸道病毒和8種埃可病毒；