[發(fā)明專利]需鈉弧菌單堿基編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310093408.7
• 申請(qǐng)日: 2023-01-18
• 公開（公告）號(hào): CN116179579A
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李文衛(wèi);李會(huì)會(huì);劉東風(fēng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/56
• 分類號(hào): C12N15/56;C12N15/55;C12N15/12;C12N15/74;C12N15/65;C12R1/63
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

1.單堿基編輯系統(tǒng)，其包括：rAPOBEC、nCas9蛋白(D10A)、UGI、Cas6f和gRNA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單堿基編輯系統(tǒng)，其特征在于，

編碼所述rAPOBEC的核酸如SEQ?ID?NO:2所示；

編碼所述nCas9蛋白(D10A)核酸如SEQ?ID?NO:1所示；

編碼所述UGI的核酸如SEQ?ID?NO:3所示；

編碼所述Cas6f的核酸如SEQ?ID?NO:4所示；

所述rAPOBEC與所述nCas9蛋白(D10A)之間用接頭A連接；接頭A的序列如SEQ?ID?NO:7所示；

所述nCas9蛋白(D10A)與所述UGI之間用接頭B連接；接頭B的序列如SEQ?ID?NO:8所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單堿基編輯系統(tǒng)，其特征在于，

所述gRNA含有特定的靶向序列，其3’端連接有Cas6f作用位點(diǎn)；

所述Cas6f作用位點(diǎn)的序列如SEQ?ID?NO:6。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的單堿基編輯系統(tǒng)，其特征在于，

所述gRNA數(shù)量為1個(gè)或多個(gè)；

所述Cas6f作用位點(diǎn)為1個(gè)或多個(gè)；

所述每個(gè)gRNA的3’端連接一個(gè)Cas6f作用位點(diǎn)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的單堿基編輯系統(tǒng)，其特征在于，所述單堿基編輯系統(tǒng)還包括抗性篩選標(biāo)記，所述抗性篩選標(biāo)記包括氯霉素抗性基因。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的單堿基編輯系統(tǒng)，其特征在于，所述單堿基編輯系統(tǒng)還包括sacB基因，所述sacB基因的序列如SEQ?ID?NO:9所示。

7.包含權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述單堿基編輯系統(tǒng)的重組載體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的重組載體，其特征在于，載體骨架包括pEX128和/或p15A。

9.如下I)～I(xiàn)I)所示中的任意一項(xiàng)在需鈉弧菌基因編輯中的應(yīng)用：

I)、權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的單堿基編輯系統(tǒng)；

II)、權(quán)利要求7或8所述的重組載體。

10.需鈉弧菌基因編輯的方法，其包括利用如下i)～ii)所示中的任意一項(xiàng)對(duì)需鈉弧菌進(jìn)行基因編輯：

i)、權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的單堿基編輯系統(tǒng)；

ii)、權(quán)利要求7或8所述的重組載體。